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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌有没有菌液PCR啊？
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syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 链霉菌有没有菌液PCR啊？

我做链霉菌同源重组 要筛到突变株要提很多管DNA 做PCR
我一般用CTAB法提 效果挺好 但是时间长 而且一个人提个20管都要累死了 不知道有没有像大肠杆菌那种直接可以做菌液PCR的
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1楼 2012-03-29 11:50:57
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gywyl1977

木虫 (正式写手)
应该可以。我们做梭菌都是可以的，但条件可能要摸索一下，比如变性时间，退火温度等。总的来说，菌液PCR要难做一点。
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2楼2012-03-29 12:18:59
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syn1985

木虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-03-29 12:18:59:
应该可以。我们做梭菌都是可以的，但条件可能要摸索一下，比如变性时间，退火温度等。总的来说，菌液PCR要难做一点。

之前是不是需要用溶菌酶之类的处理一下 再用沸水煮一下啊
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3楼2012-03-29 13:09:59
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gywyl1977

木虫 (正式写手)
菌液离心收集后洗一下就可以了，然后用buffer悬浮。PCR时菌只要极少量就可以，可以做几个梯度。DNA聚合酶也需要多试几种，不同的酶效果可能不一样。
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4楼2012-03-29 16:26:11
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syn1985

木虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-03-29 16:26:11:
菌液离心收集后洗一下就可以了，然后用buffer悬浮。PCR时菌只要极少量就可以，可以做几个梯度。DNA聚合酶也需要多试几种，不同的酶效果可能不一样。

用什么buffer悬浮啊？还有我这个链霉菌菌体很粘稠 所以如果不做其他处理菌体会悬浮不起来的 会成块 还打不散
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5楼2012-03-29 16:50:02
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gywyl1977

木虫 (正式写手)
我们这边有做链霉菌的，他们说也可以直接挑一点菌到PCR管里就行了。
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syn1985
6楼2012-03-29 17:47:15
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syn1985

木虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-03-29 17:47:15:
我们这边有做链霉菌的，他们说也可以直接挑一点菌到PCR管里就行了。

谢谢 你真热心 我还想问一下 直接挑的话那是不是需要预变性呢？
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7楼2012-03-29 19:01:16
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gywyl1977

木虫 (正式写手)
不用。你把PCR的体系配好，分装到PCR管里，当然模板是不用加的。然后用牙签挑一点点菌体到PCR管里，用移液枪反复吹吸一下把菌分散一下。然后就上PCR仪。第一循环热解时间可以长点，10min。第二循环开始就按正常的条件。
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syn1985 syn1985
8楼2012-03-29 20:20:50
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syn1985

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8楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-03-29 20:20:50:
不用。你把PCR的体系配好，分装到PCR管里，当然模板是不用加的。然后用牙签挑一点点菌体到PCR管里，用移液枪反复吹吸一下把菌分散一下。然后就上PCR仪。第一循环热解时间可以长点，10min。第二循环开始就按正常的 ...

谢谢 明天早上试一下
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9楼2012-03-29 22:05:12
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syn1985

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8楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-03-29 20:20:50:
不用。你把PCR的体系配好，分装到PCR管里，当然模板是不用加的。然后用牙签挑一点点菌体到PCR管里，用移液枪反复吹吸一下把菌分散一下。然后就上PCR仪。第一循环热解时间可以长点，10min。第二循环开始就按正常的 ...

我试过了 好用的 太谢谢了 我省去了好多功夫啊 我怎么把金币给你啊？
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10楼2012-03-30 13:31:33
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