| 查看: 1897 | 回复: 5 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
PCR标准体系有关问题。。求高手解答
|
|||
|
标准的PCR反应体系： 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul 其中10×扩增缓冲液是什么意思啊 前面怎么乘以10了， 4种dNTP混合物 各 200umol/L 这个200umol/L 不是浓度单位嘛？ 怎么配标准体系最后没有需要多少体积的该混合物 且引物的量不是定的吗？pmol是怎么换算成体积单位的啊？ Taq DNA聚合酶 2.5u 这个单位求解释的啊？ 不懂的唉 Mg2+ 1.5mmol/L 这个用量也不懂的。。。 问下大家配体系的时候是不是都换成体积单位进行试剂配置的 我自己做的PCR,体系所加试剂单位都是体积 刚看到这个标准体系 不懂的唉 求高手解答 问的低级问题 请勿喷哦。。。 谢谢 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有104人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR引物的量如何确定，求助高手指教
已经有11人回复
- pcr过程中遇到的诡异现象，求高手解释一下
已经有8人回复
- 求高手帮我分析下 PCR 实验电泳图，怎么改善！！！
已经有6人回复
- PCR高手请进，小女子有事相求，我刚来金币不要嫌少啊，我只有这么多啊，全给你了
已经有20人回复
- 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】PCR没有结果，希望高手指教
已经有29人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR的小问题,请高手指点 【问题已解决】
已经有7人回复
- 【求助/交流】有关qRT-PCR的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】有关菌液PCR的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】求教PCR高手
已经有6人回复
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）
已经有28人回复
4楼2012-03-31 19:50:03
bbwalkman
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 6
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2334.5
- 红花: 3
- 帖子: 240
- 在线: 171.7小时
- 虫号: 1279904
- 注册: 2011-04-28
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, good！ 2012-03-27 11:33:32
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, good！ 2012-03-27 11:33:32
|
1.10×的Buffer是酶的反应缓冲，是以十倍量保存，反应时要变成1×，所以100ul 体系里加了 10ul 2.dNTP一般是2.5mM的包装，你买的什么的都会有说明，所以根据你加的浓度换算成体积 3.引物是自己合成的链，这个根据你的体系加，还有你当初溶链时的浓度，然后根据你加的浓度换算体积，这个一般是过量的 4.酶量的确定可根据你聚合酶的说明书来定，U指的是Unit，就是每ul里有多少单位，根据你酶的活性加入相应的体积 5.Mg2+一般不用单独加，反应Buffer里面有，但是可能这个反应体系需要自己加吧 6.关于体积问题都要根据你储备液的浓度以及相应你要用的终浓度来换算的 |
2楼2012-03-27 10:26:13
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 还是很热心哈 2012-03-27 11:35:31
zhnchn: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 有不懂的 再请教你 2012-03-28 00:23:57
西瓜: 金币+2, MolEPI+1, 每次回帖都很认真耐心 2012-04-01 17:14:00
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 还是很热心哈 2012-03-27 11:35:31
zhnchn: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 有不懂的 再请教你 2012-03-28 00:23:57
西瓜: 金币+2, MolEPI+1, 每次回帖都很认真耐心 2012-04-01 17:14:00
|
嗯......木有人喷你了，大家都是这个阶段过来的啦 1. 10X的意思是10倍浓缩储存液，工作液是一般是1X的，所以你总体系如果用100uL，就会用10uL的缓冲液，最后不是稀释了10倍嘛~ 2. 4种dNTP混合物，是浓度标定的呀，我们一般PCR使用2.5uM（也就是2.5umol/L，但我这里指的是混好的，不是你这种分开放的)，用2~3uL就够了（针对20uL体系）所以你可以计算一下，以放大或缩小你需要加的量 3. 引物的量当然是定的了，你订来的引物需要加水溶解至储存液（我们用100uM），然后稀释至工作液（我们一般PCR用10uM），20uL的体系加1uL就够了，你可以算一下是不是在这个引物给定范围内。 4. 酶都是按活力单位U给的，不过也有给你每uL多少U的，你换算成体积（uL）就成了哦 5. Mg离子一般缓冲液会含有的，但是某些公司就是分开装的，所以遇到这种情况，你把它按你总体系多少换算过来需要多少uL Mg离子量 6. 所以配PCR体系都是按照体积加的哦~~~~~~ 如有写错，希望高手指正，祝实验顺利  |
3楼2012-03-27 10:26:41
5楼2012-08-22 15:01:52
