| 查看: 1409 | 回复: 5 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
PCR标准体系有关问题。。求高手解答
|
|||
|
标准的PCR反应体系： 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul 其中10×扩增缓冲液是什么意思啊 前面怎么乘以10了， 4种dNTP混合物 各 200umol/L 这个200umol/L 不是浓度单位嘛？ 怎么配标准体系最后没有需要多少体积的该混合物 且引物的量不是定的吗？pmol是怎么换算成体积单位的啊？ Taq DNA聚合酶 2.5u 这个单位求解释的啊？ 不懂的唉 Mg2+ 1.5mmol/L 这个用量也不懂的。。。 问下大家配体系的时候是不是都换成体积单位进行试剂配置的 我自己做的PCR,体系所加试剂单位都是体积 刚看到这个标准体系 不懂的唉 求高手解答 问的低级问题 请勿喷哦。。。 谢谢 |
回复此楼» 收录本帖的淘贴专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有193人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
-
韩国海关检测食用植物油中的苯并芘用的是哪种方法？
已经有0人回复
-
现有pP43NMK质粒，想换了pHT43，或者其他芽孢杆菌过表达质粒
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR引物的量如何确定，求助高手指教
已经有11人回复
- pcr过程中遇到的诡异现象，求高手解释一下
已经有8人回复
- 求高手帮我分析下 PCR 实验电泳图，怎么改善！！！
已经有6人回复
- PCR高手请进，小女子有事相求，我刚来金币不要嫌少啊，我只有这么多啊，全给你了
已经有20人回复
- 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】我的PCR出现问题，试过各种方法仍然无效，求助高手，不甚感激！
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR没有结果，希望高手指教
已经有29人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR的小问题,请高手指点 【问题已解决】
已经有7人回复
- 【求助/交流】有关qRT-PCR的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】有关菌液PCR的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】求教PCR高手
已经有6人回复
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）
已经有28人回复
bbwalkman
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 6
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2334.5
- 红花: 3
- 帖子: 240
- 在线: 171.7小时
- 虫号: 1279904
- 注册: 2011-04-28
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, good！ 2012-03-27 11:33:32
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, good！ 2012-03-27 11:33:32
|
1.10×的Buffer是酶的反应缓冲，是以十倍量保存，反应时要变成1×，所以100ul 体系里加了 10ul 2.dNTP一般是2.5mM的包装，你买的什么的都会有说明，所以根据你加的浓度换算成体积 3.引物是自己合成的链，这个根据你的体系加，还有你当初溶链时的浓度，然后根据你加的浓度换算体积，这个一般是过量的 4.酶量的确定可根据你聚合酶的说明书来定，U指的是Unit，就是每ul里有多少单位，根据你酶的活性加入相应的体积 5.Mg2+一般不用单独加，反应Buffer里面有，但是可能这个反应体系需要自己加吧 6.关于体积问题都要根据你储备液的浓度以及相应你要用的终浓度来换算的 |
2楼2012-03-27 10:26:13
20