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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求教PCR高手
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liuxing5157

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求教PCR高手 已有6人参与

求教PCR高手，前段时间我PCR一个基因，当时跑出来了，但条带很淡，由于实验条件有限，停止了一段时间。现在再继续跑，但怎么也跑不出来，试剂原因都排除了。
请各位前辈帮忙解答一下，非常感谢！！！
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1楼 2010-05-18 19:27:40
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gaiyf

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很可能是DNA已经降解了，建议楼主重新做吧
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多看文献，多学知识
2楼2010-05-18 20:12:24
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板是怎样保存的？应该是模板降解，前提是你的酶没有失活，体系也没有改变。
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3楼2010-05-18 20:34:15
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虫虫博士

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-18 22:24:49
这个基因不好扩增，可以考虑换换更好的酶，或者改用GC BUFFER（如果高）；或者如果是长片段，可以试试PCR程序设定两步PCR方法；如果还是不能出来，就用两步PCR吧，就是说第一次PCR30个循环，此时的PCR产物不要跑胶，直接回收，用此回收产物做模板，再做PCR，一般还是能出来的。
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4楼2010-05-18 21:13:06
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到同样的问题，期待高手。。。。。。
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5楼2010-05-18 22:56:34
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很有可能是模板的问题。
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微生物发酵
6楼2010-05-18 23:04:04
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小白兄

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
plantaqp(金币+2):欢迎交流 2010-05-19 04:52:10
PCR是有成功率的，并不是相同的体系相同的条件一定都能P出来的，楼主开始就说P的条带很弱，那有没其他非特异性条带呢？如果有的话可以相应提高退火温度，尝试增加引物的量（不一定合适）。如果没有其他非特异性条带，可以看引物设计有没问题，再适当降低退火温度。可以在PCR仪上使用不同的退火梯度来做做看。
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时光如流水，匆匆而过。
7楼2010-05-18 23:48:11
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