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liuxing5157

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求教PCR高手 已有6人参与

求教PCR高手,前段时间我PCR一个基因,当时跑出来了,但条带很淡,由于实验条件有限,停止了一段时间。现在再继续跑,但怎么也跑不出来,试剂原因都排除了。
请各位前辈帮忙解答一下,非常感谢!!!
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虫虫博士

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-18 22:24:49
这个基因不好扩增,可以考虑换换更好的酶,或者改用GC BUFFER(如果高);或者如果是长片段,可以试试PCR程序设定两步PCR方法;如果还是不能出来,就用两步PCR吧,就是说第一次PCR30个循环,此时的PCR产物不要跑胶,直接回收,用此回收产物做模板,再做PCR,一般还是能出来的。
4楼2010-05-18 21:13:06
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gaiyf

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很可能是DNA已经降解了,建议楼主重新做吧
多看文献,多学知识
2楼2010-05-18 20:12:24
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板是怎样保存的?应该是模板降解,前提是你的酶没有失活,体系也没有改变。
3楼2010-05-18 20:34:15
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xpb2005

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也遇到同样的问题,期待高手。。。。。。
5楼2010-05-18 22:56:34
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