| 查看: 552 | 回复: 2 | ||||
[求助]
融合蛋白纯化问题
|
| 我的蛋白表达时是以包涵体的形式存在，可用4M尿素溶解，离心得到上清。将这个上清溶液与镍柱结合时，发现镍柱成絮状了。而且按照普通步骤洗脱一遍后，发现结合力很低。我的平衡溶液是20mM Tris，0.5MNacl， 4 M 尿素，PH8.0。除了咪唑浓度不一样以外，其他的都一样。请知道虫友分析下原因吧，谢谢分析下原因吧，谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有57人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复- GST融合蛋白表达纯化
已经有5人回复
- 蛋白互作必会，GST纯化遇到的问题
已经有13人回复
- 高等电点（pI8.3）his融合蛋白纯化，选用何种缓冲液？
已经有7人回复
- 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
已经有9人回复
- 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
已经有16人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 蛋白降解的问题
已经有11人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 【求助/交流】蛋白质纯化的疑难问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？
已经有9人回复
- 【求助/交流】MBP融合蛋白活性低？
已经有10人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励 2012-04-29 17:42:08
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励 2012-04-29 17:42:08
|
我首先想到的是你的包涵体的变性溶解与复性的收率太低， 我从国外实验室下载的一个实验流程，你可参考： Purification of inclusion bodies and refolding of proteins http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html |
2楼2012-04-28 22:51:00
imyting
至尊木虫 (正式写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 10214.2
- 散金: 658
- 红花: 5
- 帖子: 805
- 在线: 167.6小时
- 虫号: 736362
- 注册: 2009-03-31
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+4, 很给力啊~ 2012-04-29 17:42:24
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+4, 很给力啊~ 2012-04-29 17:42:24
|
不知道你的镍柱有没有再生过呢？你在上样之前有没有平衡啊？我还不太清楚你处理时的一些细节部分。 1.再生过，那么你在加完镍之后有没有用水洗干净啊？镍在碱性环境下会形成氢氧化镍絮状沉淀；此外，镍柱变成絮状是在平衡的时候还是在上样的时候呢？平衡时变成絮状可能就是镍没洗干净，若是平衡时没问题，上样时变絮状可能就是你的样品有问题了；样品的问题主要有是否过滤、有没有巯基乙醇之类的污染等； 2.没有再生过，如果是新的镍柱第一次使用，那估计也是样品的问题；如果是用过几次的，有可能前面的人用完没有用高浓度咪唑洗干净；此外你们的柱子不会共用吧？若是共用尽量用一样的洗脱液，不然也会有影响的。 3.实在解决不了问题的话，就再生一次吧，虽然对填料会有所损害，但是也灭办法了。 |
3楼2012-04-29 09:58:25