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恶魔眼球

木虫 (小有名气)

[求助] PCR时出现了非目的片段的超大片段条带

最近做pcr一直不出结果,竟然出现了非目的片段的超大片段条带,怎么办呢。PS:我们的反应体系是20uL的:ddwater 13.7uL,buffer 2.0uL,引物各1.0uL(10uM),dNTP0.8uL,Taq 酶0.5uL(2U/uL),模板1uL;反应过程:95° 5min,(94°  40s,59°  50s, 72°  50s)35cycles,72°  10min;目的条带是1570bp的;假期前按照上述体系有结果的,只是送去测序的时候,浓度太低没有测出来。现在重新测,一样的东西,却没有结果了。各位大虾,请指点迷津~~

marker 是DL2000,最亮的ladder是750bp
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流! 2012-03-18 20:06:19
你的模板是啥?提取的基因组DNA,稀释过么?浓度多少?
2楼2012-03-18 15:16:21
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


恶魔眼球: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-03-19 09:39:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔眼球 at 2012-03-18 17:11:36:
对,是基因组DNA。浓度是50 ng/μL。

应该是模板,你应该先稀释,可以做上几个浓度梯度,试验一下。
延伸时间应该加长,如ls所说,至少1.5分。
8楼2012-03-19 08:32:35
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