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恶魔眼球

木虫 (小有名气)

[求助] PCR时出现了非目的片段的超大片段条带

最近做pcr一直不出结果,竟然出现了非目的片段的超大片段条带,怎么办呢。PS:我们的反应体系是20uL的:ddwater 13.7uL,buffer 2.0uL,引物各1.0uL(10uM),dNTP0.8uL,Taq 酶0.5uL(2U/uL),模板1uL;反应过程:95° 5min,(94°  40s,59°  50s, 72°  50s)35cycles,72°  10min;目的条带是1570bp的;假期前按照上述体系有结果的,只是送去测序的时候,浓度太低没有测出来。现在重新测,一样的东西,却没有结果了。各位大虾,请指点迷津~~

marker 是DL2000,最亮的ladder是750bp
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

我觉得除了模板浓度的问题,可能造成模板在电泳图中显示。另外,我觉得引物是不是设计的合理。同样的引物,有两个作用模板也会出现上面的情况。大片段的合成慢,小片段合成速度快,在同样的时间里,小片段合成的浓度就大,电泳出来亮度就高
17楼2012-06-29 12:04:21
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