应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光PCR中，荧光阀值的问题
51/1返回列表
查看: 2659  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liwanghua251

金虫 (小有名气)

[交流] 荧光PCR中，荧光阀值的问题

我做相对定量，什么时候需要手动设置阀值？
做了两板PCR，怎么才能一起分析相对定量。例如，一个板子上是0h,12h,24h,36h。另一板上是0h,48h,60h,72h.想把他们同一起来比较，得出不同时间段的表达差异。
是否需要把两板中的0h,的Ct值调成一致。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-14 09:17:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liwanghua251: 金币+1 2012-03-16 18:12:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by liwanghua251 at 2012-03-16 12:20:24:
可能不可能是引物二聚体。

阴性对照没有模板，只有引物，怎么会有带？所以不会是引物二聚体，应该是你的体系污染。如果你的样品扩增过程 中出现了另外的峰，则要么是非特异性扩增，要么是引物二聚体
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-16 16:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
liwanghua251(金币+1): 2012-03-15 09:05:59
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-03-15 09:58:29
不用调阈值的，调了也没意义。阈值虽然能影响CT值，但是不能影响Ct值的差异（前提是阈值设置在合理范围）。
你两个板的不同时间点的样品分别和同一个板上的0h比较，两个板的结果可以放在一起，不过严谨的做法应该是所有样品都在同一个板上跑。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-03-14 22:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liwanghua251

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-14 22:43:50:
不用调阈值的，调了也没意义。阈值虽然能影响CT值，但是不能影响Ct值的差异（前提是阈值设置在合理范围）。
你两个板的不同时间点的样品分别和同一个板上的0h比较，两个板的结果可以放在一起，不过严谨的做法应该 ...

我也知道严谨的做法，但是实在是没法放在一起。是不是说一般的阀值都不用改，按照机器给的就可以了吗？
还有个问题就是，阴性对照的作用是什么？我做的阴性对照也有峰怎么回事？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-15 09:05:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liwanghua251: 金币+1 2012-03-16 12:21:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by liwanghua251 at 2012-03-15 09:05:48:
我也知道严谨的做法，但是实在是没法放在一起。是不是说一般的阀值都不用改，按照机器给的就可以了吗？
还有个问题就是，阴性对照的作用是什么？我做的阴性对照也有峰怎么回事？

一般做 荧光定量的话都不用调阀值的，按机器默认的就行。阴性对照有峰说明你的体系可能有污染
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-15 17:49:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭