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liwanghua251

金虫 (小有名气)


[交流] 荧光PCR中,荧光阀值的问题

我做相对定量,什么时候需要手动设置阀值?
做了两板PCR,怎么才能一起分析相对定量。例如,一个板子上是0h,12h,24h,36h。另一板上是0h,48h,60h,72h.想把他们同一起来比较,得出不同时间段的表达差异。
是否需要把两板中的0h,的Ct值调成一致。
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小猫三两只

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liwanghua251: 金币+1 2012-03-16 12:21:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by liwanghua251 at 2012-03-15 09:05:48:
我也知道严谨的做法,但是实在是没法放在一起。是不是说一般的阀值都不用改,按照机器给的就可以了吗?
还有个问题就是,阴性对照的作用是什么?我做的阴性对照也有峰怎么回事?

一般做 荧光定量的话都不用调阀值的,按机器默认的就行。阴性对照有峰说明你的体系可能有污染
4楼2012-03-15 17:49:10
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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包,谢谢回帖
liwanghua251(金币+1): 2012-03-15 09:05:59
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-03-15 09:58:29
不用调阈值的,调了也没意义。阈值虽然能影响CT值,但是不能影响Ct值的差异(前提是阈值设置在合理范围)。
你两个板的不同时间点的样品分别和同一个板上的0h比较,两个板的结果可以放在一起,不过严谨的做法应该是所有样品都在同一个板上跑。
2楼2012-03-14 22:43:50
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liwanghua251

金虫 (小有名气)


引用回帖:
: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-14 22:43:50:
不用调阈值的,调了也没意义。阈值虽然能影响CT值,但是不能影响Ct值的差异(前提是阈值设置在合理范围)。
你两个板的不同时间点的样品分别和同一个板上的0h比较,两个板的结果可以放在一起,不过严谨的做法应该 ...

我也知道严谨的做法,但是实在是没法放在一起。是不是说一般的阀值都不用改,按照机器给的就可以了吗?
还有个问题就是,阴性对照的作用是什么?我做的阴性对照也有峰怎么回事?
3楼2012-03-15 09:05:48
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liwanghua251

金虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-03-15 17:49:10:
一般做 荧光定量的话都不用调阀值的,按机器默认的就行。阴性对照有峰说明你的体系可能有污染

可能不可能是引物二聚体。
5楼2012-03-16 12:20:24
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