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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒转化完 传代后发现变小 再传一代质粒直接消失了
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judy520

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒转化完 传代后发现变小 再传一代质粒直接消失了

从老外那要来一个质粒11.3kb，转化大肠杆菌DH5a很正常，提质粒后条带如下

之后转化ET12567 转化很困难但是终于转进去了，提质粒如下：
第五道和第六道的是转进去的 很高兴 结果后面准备做接合转移 把保的菌摇起来提质粒发现质粒变小了  第二天再摇再提 质粒直接不见了

一道Marker， 二、三道ET12567原菌提质粒，四五道 质粒变小  六七道 质粒不见了 请问又没人遇到过相似的问题呀  有人说是需要recA缺失的ET12567菌 我不晓得我们实验室的是不是 前人留下的  这个能验证吗？
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敢于开始
1楼 2012-03-07 15:35:35
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judy520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by liudt1105 at 2012-03-07 15:51:38:
你的培养基配方是什么啊？
这些大肠杆菌工程菌往往有缺陷，要注意控制生长速度，长得太快了质粒就掉了。放慢点速度试试看？

我一直用的LB培养基  摇一夜 很奇怪质粒为什么会变小呢 是ET12567里有核酸酶 把质粒切掉一部分吗
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敢于开始
6楼2012-03-07 16:41:14
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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judy520(金币+3): ★有帮助 2012-03-07 17:35:26
不知道你的质粒是不是具有抗生素抗性，在传代培养时是否在培养基中加入了相应的抗生素。再有，质粒形成超螺旋结构后，在琼脂糖电泳中的迁移速度会加快，希望这些对你有些帮助。
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2楼2012-03-07 15:51:32
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liudt1105

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
judy520(金币+1): ★有帮助 2012-03-07 17:35:40
你的培养基配方是什么啊？
这些大肠杆菌工程菌往往有缺陷，要注意控制生长速度，长得太快了质粒就掉了。放慢点速度试试看？
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安琪酵母浸粉、蛋白胨，您实验的好助手
3楼2012-03-07 15:51:38
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
judy520(金币+1): ★有帮助 2012-03-07 17:36:13
确定是否有筛选压力，如果没有，传代过程中质粒很容易丢失。
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Thank-you，so-blue.
4楼2012-03-07 16:27:15
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