24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2088  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

[求助] 为何PCR产物测序只测一部分?

想做一些看家基因分析,文献给的扩增引物和测序引物信息(位点)结果如下:
F:1162-1190      R:2126-2155  扩增产物994bp
F1:1273-1291    R1:2135-2152  测序产物879bp  实际测得540bp

问题一:为何测序只测PCR扩出来的一部分?如果本来只需这一小段的话为何不直接扩这一段?

问题二:根据测序引物的位点推测产物应该是879bp,为何实际测序结果是540bp?

很困惑,请教大虾!感激不尽!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

每天进步一点点,持之以恒!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宝杰罗生物

捐助贵宾 (小有名气)


你扩增的PCR产物有问题,最少也能测到900bp;测序公司没给你测完,最好重新优化条件吧。
5楼2012-02-23 11:57:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

smilerion

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-02-23 08:16:07
因为扩增引物结合在模板上,测序引物是是结合在需要测序的PCR产物上的。
同时测序的结果在前100bp左右是不准的,一般不参考。
2楼2012-02-23 02:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

引用回帖:
2楼: Originally posted by smilerion at 2012-02-23 02:56:50:
因为扩增引物结合在模板上,测序引物是是结合在需要测序的PCR产物上的。
同时测序的结果在前100bp左右是不准的,一般不参考。

你的意思我明白,可我的问题还是没有搞明白
一般PCR产物测序就直接用PCR的引物测,可它这为何是在PCR的目的产物中间选的引物来测序?
测序前100bp确实不宜参考,可我看它那差的是300多bp啊?
为什么呢?
每天进步一点点,持之以恒!
3楼2012-02-23 09:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-24 15:18:57
首先要说明测序引物比扩增引物的要求要高,比如Tm值,GC含量,序列结构,要在保守区等,有时候设计扩增引物为了保证扩增出来的质量,不能和测序引物兼容。
其次,如果测出来的序列只有500多,那么你用扩增引物或者测序引物扩增出来的片段有多大?目标序列少很多肯定不对的
4楼2012-02-23 10:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 3/150 2026-04-22 03:56 by 啊哒哒哒叨
[论文投稿] 急需审稿人!!! +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +7 随心所欲☆ 2026-04-15 8/400 2026-04-21 08:22 by Equinoxhua
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
信息提示
请填处理意见