24小时热门版块排行榜    

查看: 2369  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

[求助] 为何PCR产物测序只测一部分?

想做一些看家基因分析,文献给的扩增引物和测序引物信息(位点)结果如下:
F:1162-1190      R:2126-2155  扩增产物994bp
F1:1273-1291    R1:2135-2152  测序产物879bp  实际测得540bp

问题一:为何测序只测PCR扩出来的一部分?如果本来只需这一小段的话为何不直接扩这一段?

问题二:根据测序引物的位点推测产物应该是879bp,为何实际测序结果是540bp?

很困惑,请教大虾!感激不尽!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

每天进步一点点,持之以恒!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宝杰罗生物

捐助贵宾 (小有名气)


你扩增的PCR产物有问题,最少也能测到900bp;测序公司没给你测完,最好重新优化条件吧。
5楼2012-02-23 11:57:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

smilerion

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-02-23 08:16:07
因为扩增引物结合在模板上,测序引物是是结合在需要测序的PCR产物上的。
同时测序的结果在前100bp左右是不准的,一般不参考。
2楼2012-02-23 02:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

引用回帖:
2楼: Originally posted by smilerion at 2012-02-23 02:56:50:
因为扩增引物结合在模板上,测序引物是是结合在需要测序的PCR产物上的。
同时测序的结果在前100bp左右是不准的,一般不参考。

你的意思我明白,可我的问题还是没有搞明白
一般PCR产物测序就直接用PCR的引物测,可它这为何是在PCR的目的产物中间选的引物来测序?
测序前100bp确实不宜参考,可我看它那差的是300多bp啊?
为什么呢?
每天进步一点点,持之以恒!
3楼2012-02-23 09:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-24 15:18:57
首先要说明测序引物比扩增引物的要求要高,比如Tm值,GC含量,序列结构,要在保守区等,有时候设计扩增引物为了保证扩增出来的质量,不能和测序引物兼容。
其次,如果测出来的序列只有500多,那么你用扩增引物或者测序引物扩增出来的片段有多大?目标序列少很多肯定不对的
4楼2012-02-23 10:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 03:31 by xxniao123
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见