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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 看看这个图，酶切完电泳图
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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)

[交流] 看看这个图，酶切完电泳图

如图，抽提的重组质粒EcoRI/BamHI双酶切,电泳跑出来怎么是这个样子,还是做了两次

下边这个是未酶切的质粒


[ Last edited by 1949stone on 2012-2-16 at 15:59 ]
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1楼 2012-02-14 13:41:05
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fdfbox

木虫 (正式写手)
★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
好像是没有质粒！
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2楼2012-02-14 13:51:09
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ewuyanfei

木虫 (职业作家)
★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
帮顶一个：）
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3楼2012-02-14 14:07:28
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j2

木虫 (正式写手)
★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
是被切成很多小的带还是质粒浓度太低看不出来
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5楼2012-02-14 14:40:41
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jinzhi8688

铜虫 (初入文坛)
★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): 有道理！ 2012-02-14 16:13:17
你在酶切前应该确定你的抽提有没有问题？
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6楼2012-02-14 15:41:11
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司马诸葛

木虫 (正式写手)
★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 同意啊~节日快乐~ 2012-02-14 16:13:41
你先把未没切的重组质粒跑个胶，如果质粒提取没问题
再检查一下EcoRI/BamHI在重组质粒上是不是单克隆位点酶切位点。
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7楼2012-02-14 15:43:06
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sgy0608

新虫 (初入文坛)
★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
好像是上样量过大，超过了孔负荷吧
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8楼2012-02-14 16:00:16
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gandalf886

银虫 (小有名气)
★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
酶切加的质粒太多了。看你这个亮度10微升体系切1微升质粒足够了
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9楼2012-02-14 16:03:18
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paco120

新虫 (初入文坛)
★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
好像酶切是切开了，不知楼主的目的片段是多大，目的片段有木有切开就不知道了。。。电泳拖尾太长会不会是电压过大啊。。。
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11楼2012-02-14 18:31:48
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0301nan

新虫 (初入文坛)
看不懂啊
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12楼2012-02-14 18:52:36
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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)
酶用错了，谢谢了各位
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13楼2012-02-14 18:59:48
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
像是切乱了，双酶切的Buffer确定一下
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14楼2012-02-14 21:24:21
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常小晶

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
抽提的质粒有问题
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15楼2012-02-15 01:41:05
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼主是不是第二张图点样孔在下面啊？怎么能没有酶切的比酶切后的跑的还快啊？？
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16楼2012-02-15 08:01:52
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longrna

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
电泳图看不清点样孔在上还是在下.....
另外上样量也有点多
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17楼2012-02-15 09:27:31
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whb21

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你提取的质粒质量不是很好，有很大的拖尾现象，不知道你用的是什么marker，但第二张图上看质粒位置貌似不对啊...
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18楼2012-02-15 09:32:13
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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)
点样孔在下，marker都是1000的，我已经知道问题所在了，谢谢各位
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19楼2012-02-15 10:35:54
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character

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可能是切散了吧 你的片段上这两个酶切位点是不是比较多
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20楼2012-02-15 11:10:42
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hxwhu

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
电泳方向和抽提过程、酶切过程讲讲清楚，看看我能不能帮你分析一下
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21楼2012-02-15 12:24:31
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chong1217

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
刚开始学分子生物，帮不上忙。
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22楼2012-02-15 12:39:01
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guojianping

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
（1）你的质粒切出来应该是多大的？疑似条带看下有没有
（2）可能质粒降解？以前碰到过，只能重提了
（3）减少上样量，看的清楚点
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23楼2012-02-16 13:42:10
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chitty6361

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
我和你用的酶一样，我切出来效果很好，我用的是Takara公司的试剂盒，你可以试试，体系如下：
DNA小于等于1ug
Eco没和Bam酶各1ul
K Buffer 2ul
酶切时间小于3小时
祝你成功！嘿嘿……
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24楼2012-03-12 09:08:04
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麻花13

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
本身质粒提的就不够好，酶切完之后出现拖尾，可能是因为酶切太久了
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25楼2012-03-12 12:00:07
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dorecnu

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
1.质粒提取建议使用高纯度的试剂盒，如果没有条件酚氯仿后务必乙醇沉淀纯化，提取中等拷贝数的质粒，建议菌液OD=1.5左右 4ML提取。
2.检查质粒中的B/E酶切位点，如果位点很多，当然可以理解。
3.检查是否在酶切反应过程中限制性内切酶产生了星号活性？建议A：2ug质粒酶切3小时左右，体系设置成50-100ul.B:采用NEB HF酶，避免星号活性的产生。
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26楼2012-03-12 12:06:59
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kanghuijun4楼
2012-02-14 14:10   回复  
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hdengmin10楼
2012-02-14 16:47   回复  
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
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