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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 看看这个图，酶切完电泳图

如图，抽提的重组质粒EcoRI/BamHI双酶切,电泳跑出来怎么是这个样子,还是做了两次

下边这个是未酶切的质粒

[ Last edited by 1949stone on 2012-2-16 at 15:59 ]

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1楼2012-02-14 13:41:05

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dorecnu

木虫 (正式写手)

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1.质粒提取建议使用高纯度的试剂盒，如果没有条件酚氯仿后务必乙醇沉淀纯化，提取中等拷贝数的质粒，建议菌液OD=1.5左右 4ML提取。
2.检查质粒中的B/E酶切位点，如果位点很多，当然可以理解。
3.检查是否在酶切反应过程中限制性内切酶产生了星号活性？建议A：2ug质粒酶切3小时左右，体系设置成50-100ul.B:采用NEB HF酶，避免星号活性的产生。