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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于毕赤酵母gs115可否用转化化学转化
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qurande

金虫 (小有名气)

[求助] 关于毕赤酵母gs115可否用转化化学转化 已有1人参与

问题1，GS115能不能用化学转化方法，用氯化锂处理细胞制成感受态，然后用鲑精NDA 试剂进行转化
2，我用的载体是pPIC9k，能否以非线性的状态进行化学转化？若转化的质粒必须是线性的，那么化学转化方法可以转化线性的DNA么？
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1楼 2012-01-12 17:09:54
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-01-13 10:32:07
1.可以，但肯定没有电转效率高，而且对感受态要求高。
2.最好线性化下，化学转化本来效率就不高，线性化质粒转化效率比环状质粒要高些。

您好，我还有几个问题想请教您一下，麻烦您了，谢谢
我用的是毕赤酵母GS115和KM71，载体是PIC3.5K，线性化酶是SacI
1. 电转后直接涂加YNB、生物素和葡萄糖的MD板就可以了吗？长出来的是不是就是阳性克隆子？
2. 转化后我看手册上说GS115是mut+型，而KM71是muts型？那还用不用进一步进行分型鉴定了？用必要？
3. 有必要进行多拷贝数的筛选吗？
4.我准备进行不同梯度的筛选，G418的浓度分别是0.5,1,2,4.有必要这样分吗？还是直接选一个浓度梯度就行了？
5. 保存菌种的时候，收集菌以后直接由PYD重悬至OD-50-100，然后加80%的甘油至终浓度为15%可以吗？
6. 做多拷贝数克隆子筛选的时候，G418是制平板的时候加进去的还是做好平板，在用之前涂上去的？，要涂得话应该怎么操作?谢谢
7. 做PCR鉴定的时候能不能用菌落PCR？引物用我的特异性引物可以吗？
期待您的回复！
我刚开始做，一些基本的问题都搞不明白，希望您多多指教！多给我讲点东西，谢谢
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
6楼2012-09-10 17:50:03
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.可以，但肯定没有电转效率高，而且对感受态要求高。
2.最好线性化下，化学转化本来效率就不高，线性化质粒转化效率比环状质粒要高些。
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Thank-you，so-blue.
2楼2012-01-13 10:32:07
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doublehelix

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-01-13 10:32:07:
1.可以，但肯定没有电转效率高，而且对感受态要求高。
2.最好线性化下，化学转化本来效率就不高，线性化质粒转化效率比环状质粒要高些。

线性化质粒转化效率比环状质粒要高些？？？你说反了吧
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3楼2012-01-13 17:22:30
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啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以化转
线性化的效率高，因为是要整合到基因组里的，线性化的更容易些。
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4楼2012-01-14 09:53:41
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