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qurande

金虫 (小有名气)

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[求助] 关于毕赤酵母gs115可否用转化化学转化已有1人参与

问题1，GS115能不能用化学转化方法，用氯化锂处理细胞制成感受态，然后用鲑精NDA 试剂进行转化
2，我用的载体是pPIC9k，能否以非线性的状态进行化学转化？若转化的质粒必须是线性的，那么化学转化方法可以转化线性的DNA么？

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1楼2012-01-12 17:09:54

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475502411

铜虫 (著名写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by susizheng at 2012-01-13 10:32:07
1.可以，但肯定没有电转效率高，而且对感受态要求高。
2.最好线性化下，化学转化本来效率就不高，线性化质粒转化效率比环状质粒要高些。

您好，我还有几个问题想请教您一下，麻烦您了，谢谢
我用的是毕赤酵母GS115和KM71，载体是PIC3.5K，线性化酶是SacI
1. 电转后直接涂加YNB、生物素和葡萄糖的MD板就可以了吗？长出来的是不是就是阳性克隆子？
2. 转化后我看手册上说GS115是mut+型，而KM71是muts型？那还用不用进一步进行分型鉴定了？用必要？
3. 有必要进行多拷贝数的筛选吗？
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5. 保存菌种的时候，收集菌以后直接由PYD重悬至OD-50-100，然后加80%的甘油至终浓度为15%可以吗？
6. 做多拷贝数克隆子筛选的时候，G418是制平板的时候加进去的还是做好平板，在用之前涂上去的？，要涂得话应该怎么操作?谢谢
7. 做PCR鉴定的时候能不能用菌落PCR？引物用我的特异性引物可以吗？
期待您的回复！
我刚开始做，一些基本的问题都搞不明白，希望您多多指教！多给我讲点东西，谢谢