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qurande金虫 (小有名气)
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关于毕赤酵母gs115可否用转化化学转化 已有1人参与
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问题1，GS115能不能用化学转化方法，用氯化锂处理细胞制成感受态，然后用鲑精NDA 试剂进行转化 2，我用的载体是pPIC9k，能否以非线性的状态进行化学转化？若转化的质粒必须是线性的，那么化学转化方法可以转化线性的DNA么？ |
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2楼2012-01-13 10:32:07
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4楼2012-01-14 09:53:41
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5楼2012-01-14 10:20:55
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您好，我还有几个问题想请教您一下，麻烦您了，谢谢 我用的是毕赤酵母GS115和KM71，载体是PIC3.5K，线性化酶是SacI 1. 电转后直接涂加YNB、生物素和葡萄糖的MD板就可以了吗？长出来的是不是就是阳性克隆子？ 2. 转化后我看手册上说GS115是mut+型，而KM71是muts型？那还用不用进一步进行分型鉴定了？用必要？ 3. 有必要进行多拷贝数的筛选吗？ 4.我准备进行不同梯度的筛选，G418的浓度分别是0.5,1,2,4.有必要这样分吗？还是直接选一个浓度梯度就行了？ 5. 保存菌种的时候，收集菌以后直接由PYD重悬至OD-50-100，然后加80%的甘油至终浓度为15%可以吗？ 6. 做多拷贝数克隆子筛选的时候，G418是制平板的时候加进去的还是做好平板，在用之前涂上去的？，要涂得话应该怎么操作?谢谢 7. 做PCR鉴定的时候能不能用菌落PCR？引物用我的特异性引物可以吗？ 期待您的回复！ 我刚开始做，一些基本的问题都搞不明白，希望您多多指教！多给我讲点东西，谢谢 |
6楼2012-09-10 17:50:03
7楼2015-04-01 09:46:39
