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xy19860508

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于RNA转录后的CDNA模板进行PCR的一些问题的请教

小弟近日对病毒的rna进行抽提(Trizol法),得到RNA之后用宝生物的反转录试剂盒进行转录,得到cDNA。
以得到的cDNA做为模板来进行PCR反应。先用针对某基因的短片段(300bp)的引物进行检测,能得到阳性的结果(附带的阴性对照未出现结果)。而对该检测存在的基因进行全基因(1700bp)扩增的时候,无片段扩增(全基因的扩增引物无问题,因为我在暑假的时候用该对引物成功的扩增出了片段)。
小弟不知道是哪一个环节出错,求指点,不盛感激。(初步怀疑为抽提得到的RNA为断裂的片段,因此无法得到长片段的PCR产物)
求高人指点
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ziyan1906

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-01-09 13:34:25
可以先做RNA纯度分析(非变性凝胶电泳),确定RNA是否断裂,若真的断裂,就再提一次吧
2楼2012-01-09 10:15:49
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xy19860508

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by ziyan1906 at 2012-01-09 10:15:49:
可以先做RNA纯度分析(非变性凝胶电泳),确定RNA是否断裂,若真的断裂,就再提一次吧

嗯,我初步怀疑也是RNA断裂以及降解挺厉害的,我也决定重新抽提
3楼2012-01-09 12:58:38
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