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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNA转录后的CDNA模板进行PCR的一些问题的请教
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xy19860508

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于RNA转录后的CDNA模板进行PCR的一些问题的请教

小弟近日对病毒的rna进行抽提（Trizol法），得到RNA之后用宝生物的反转录试剂盒进行转录，得到cDNA。
以得到的cDNA做为模板来进行PCR反应。先用针对某基因的短片段(300bp)的引物进行检测，能得到阳性的结果（附带的阴性对照未出现结果）。而对该检测存在的基因进行全基因（1700bp）扩增的时候，无片段扩增（全基因的扩增引物无问题，因为我在暑假的时候用该对引物成功的扩增出了片段）。
小弟不知道是哪一个环节出错，求指点，不盛感激。（初步怀疑为抽提得到的RNA为断裂的片段，因此无法得到长片段的PCR产物）
求高人指点
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1楼 2012-01-06 19:20:51
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ziyan1906

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-01-09 13:34:25
可以先做RNA纯度分析（非变性凝胶电泳），确定RNA是否断裂，若真的断裂，就再提一次吧
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2楼2012-01-09 10:15:49
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xy19860508

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by ziyan1906 at 2012-01-09 10:15:49:
可以先做RNA纯度分析（非变性凝胶电泳），确定RNA是否断裂，若真的断裂，就再提一次吧

嗯，我初步怀疑也是RNA断裂以及降解挺厉害的，我也决定重新抽提
赞一下 回复此楼
3楼2012-01-09 12:58:38
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