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5xiaosh

银虫 (小有名气)

[交流] 提的质粒跑的很宽,看大小,该看上面那条带,还是下面那条带 已有6人参与

问个很菜的问题,提的质粒跑的很宽,看大小,该看上面那条带,还是下面那条带?
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yuxia82012

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
看前沿,就是下面那条
在等待中涅槃重生
2楼2011-12-20 14:27:22
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-12-20 18:22:25
质粒的大小要酶切之后才能看出来,因为提取的质粒大部分是超螺旋,而超螺旋在凝胶中的迁移速率较线性的质粒快。
质粒提的好的话,电泳能看见3条带:最前面的超螺旋,中间的开环,最后的线性(也有说是复制中间体)。
3楼2011-12-20 15:15:47
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by Rubisco580 at 2011-12-20 15:15:47:
质粒的大小要酶切之后才能看出来,因为提取的质粒大部分是超螺旋,而超螺旋在凝胶中的迁移速率较线性的质粒快。
质粒提的好的话,电泳能看见3条带:最前面的超螺旋,中间的开环,最后的线性(也有说是复制中间体 ...

谢谢,酶切后看大小要比这样看准确,^_^,我提了两条带,这是目前为止我提的最好的带啦,O(∩_∩)O~
4楼2011-12-20 15:29:42
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

西瓜: 样品量太大,挤不下,条带就宽了。如果要条带细点,可以减少上样量,用窄的梳子来做胶。 2011-12-21 18:46:05
引用回帖:
: Originally posted by yuxia82012 at 2011-12-20 14:27:22:
看前沿,就是下面那条

不知道,我有时一样的质粒,加样浓度不一样,发现他们其实是上面(就是一线对齐的),而不是在二线对齐。我也纳闷了~
5楼2011-12-20 15:30:59
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rintor

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你把上样体积减少一半后再跑胶看看就知道了
不要轻易言败
6楼2011-12-21 11:27:37
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ccharlien

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+1): 同意!光圈、曝光时间都可以调小。 2011-12-21 18:44:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by 5xiaosh at 2011-12-20 15:30:59:
不知道,我有时一样的质粒,加样浓度不一样,发现他们其实是上面(就是一线对齐的),而不是在二线对齐。我也纳闷了~

那是你上样量太大了 光晕起来就看不清带了 扫胶时把光圈调小
7楼2011-12-21 11:29:33
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by rintor at 2011-12-21 11:27:37:
你把上样体积减少一半后再跑胶看看就知道了

嗯(^_-)
8楼2011-12-21 11:30:09
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neon_alone

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
应该酶切之后看大小。
9楼2011-12-22 14:04:28
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by neon_alone at 2011-12-22 14:04:28:
应该酶切之后看大小。

那酶切之后 还跑这么宽  看一线还是看二线呢 ?
10楼2011-12-22 14:22:55
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