| 查看: 2383 | 回复: 9 | ||
tuodecai铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
求体外转录 已有2人参与
|
|
我这体外转录断断续续做了近一年了，已经用了两个试剂盒，第一个是ambion公司的mMESSAGE mMACHINE Kit High Yield Capped RNA Transcription Kit，刚买了第二个试剂盒（Promega公司的RiboMAX Large Scale RNA Production Systems—SP6 and T7），做了几次仍未成功，但每次试剂盒里的对照都能转成功的。我的实验是要转录出一条11kb的病毒基因组RNA，用带T7启动子的PCR的产物作为模板进行体外转录。我觉得体外转录的模板应该比较关键，不知是不需要做什么特殊的处理？也许是因为片段较大，我每次PCR产物回收后的浓度(50ng/ul)远达不到试剂盒里的浓度（第一个kit要求1ug/ul，第二个要求5-10ug的性线化模板量），而我也用乙醇沉淀后，效果同样不理想。请有体外转录经验的高手支招，多多交流下下您们的经验，看看做体外转录最需要注意的是哪些方面。不尽感激！ [ Last edited by 1949stone on 2011-12-20 at 13:28 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有103人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RNA电泳
已经有14人回复
- 关于转录因子调控的下游基因
已经有13人回复
- 反转录高手进来~~
已经有8人回复
- 反转录
已经有16人回复
- 它怎么就反转录不出来，求教
已经有4人回复
- 【求助】关于转录因子结合点的PWM
已经有6人回复
- 【求助/交流】请问高手：转录后调节和翻译后调节的区别
已经有5人回复
- 【求助/交流】反转录过程中的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】反转录时该选用oligo dT还是 随机6引物？
已经有9人回复
- 【分享】连接miRNA到胚胎干细胞的核心转录调控环
已经有4人回复
- 【求助/交流】体外转录11kb的片段用哪个公司的试剂比较好？
已经有11人回复
- 【求助/交流】用SMART技术得到一个基因的5‘ RACE后，是不是就知道该基因的转录起始位
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于体外转录的模板
已经有8人回复
- 【求助/交流】跪求反转录失败的原因
已经有16人回复
lilyjimei
新虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1072.8
- 帖子: 274
- 在线: 39.8小时
- 虫号: 1085748
- 注册: 2010-08-31
- 专业: 水产生物遗传育种学
2楼2012-06-04 21:57:43
tuodecai
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 18099.5
- 散金: 1015
- 红花: 8
- 帖子: 2469
- 在线: 487.5小时
- 虫号: 803416
- 注册: 2009-07-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2012-06-06 00:06:29
lilyjimei
新虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1072.8
- 帖子: 274
- 在线: 39.8小时
- 虫号: 1085748
- 注册: 2010-08-31
- 专业: 水产生物遗传育种学
4楼2012-06-23 22:59:27
fuweilin2013
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 27.8
- 帖子: 10
- 在线: 12.2小时
- 虫号: 2569423
- 注册: 2013-07-28
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
5楼2013-10-27 21:36:43
dadadalin
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 105.3
- 帖子: 25
- 在线: 12.1小时
- 虫号: 6849699
- 注册: 2017-06-26
- 专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫
6楼2019-12-01 20:27:28
dadadalin
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 105.3
- 帖子: 25
- 在线: 12.1小时
- 虫号: 6849699
- 注册: 2017-06-26
- 专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫
7楼2019-12-01 20:27:50
tuodecai
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 18099.5
- 散金: 1015
- 红花: 8
- 帖子: 2469
- 在线: 487.5小时
- 虫号: 803416
- 注册: 2009-07-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2019-12-02 07:02:54
dadadalin
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 105.3
- 帖子: 25
- 在线: 12.1小时
- 虫号: 6849699
- 注册: 2017-06-26
- 专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫
9楼2019-12-02 09:27:54
|
本帖内容被屏蔽 |
10楼2020-11-23 10:47:53
10