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tuodecai铁杆木虫 (著名写手)
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求体外转录已有2人参与
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我这体外转录断断续续做了近一年了，已经用了两个试剂盒，第一个是ambion公司的mMESSAGE mMACHINE Kit High Yield Capped RNA Transcription Kit，刚买了第二个试剂盒（Promega公司的RiboMAX Large Scale RNA Production Systems—SP6 and T7），做了几次仍未成功，但每次试剂盒里的对照都能转成功的。我的实验是要转录出一条11kb的病毒基因组RNA，用带T7启动子的PCR的产物作为模板进行体外转录。我觉得体外转录的模板应该比较关键，不知是不需要做什么特殊的处理？也许是因为片段较大，我每次PCR产物回收后的浓度(50ng/ul)远达不到试剂盒里的浓度（第一个kit要求1ug/ul，第二个要求5-10ug的性线化模板量），而我也用乙醇沉淀后，效果同样不理想。请有体外转录经验的高手支招，多多交流下下您们的经验，看看做体外转录最需要注意的是哪些方面。不尽感激！ [ Last edited by 1949stone on 2011-12-20 at 13:28 ] |
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