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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达构建载体第一步就走不下去，给点意见吧
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landscape37

新虫 (小有名气)

[求助] 原核表达构建载体第一步就走不下去，给点意见吧

做原核表达，为拿到一已知基因的cds，设计引物，pcr，回收目的片段，连接，转化，经菌落pcr酶切鉴定，选了4个克隆子送测序，结果都是我的目的基因的姊妹基因（两个姊妹基因的cds大概有10几个碱基不同），感觉刚开始实验就不顺利，哎，不知道是继续选择克隆子送去测序，还是直接重新设计引物重头开始做了，请大侠们给点意见吧感谢非常
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1楼 2011-12-20 04:46:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
landscape37(金币+5): 谢谢 2012-01-08 08:41:23
你从哪里克隆出来的，文献中又是从什么地方克隆的？你的基因来源和文献报道的不同的话克隆出来是很可能有碱基不同的，没什么奇怪的。
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2楼2011-12-20 07:49:48
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
landscape37(金币+5): 谢谢 2012-01-08 08:41:35
一定要目的基因的话,10几个碱基不同,可以的看看突变容易不容易做,容易做就重叠PCR突变吧.
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为什么
3楼2011-12-20 11:15:12
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