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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解释！PCR产物在目的区有很亮的拖尾！需要回收目的片段！怎么办啊?
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fangxia1007

金虫 (初入文坛)

[求助] 求解释！PCR产物在目的区有很亮的拖尾！需要回收目的片段！怎么办啊?

我的片段5.1kb，PCR扩增跑胶成这样了，有严重的弥散拖尾，怎么回事！该怎样优化呢？求助大家出出主意

PCR扩增5.1kb基因电泳图
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坚持吧
1楼 2011-12-17 22:21:02
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
fangxia1007(金币+3): 提高退火试过了还是没有！不过可以试试降落的 2011-12-18 14:37:23
你这应该是没有特异性扩增条带，建议考虑提高退火温度，或用降落PCR
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2楼2011-12-17 22:59:23
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pophust

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR失败了。 感觉像是酶加少了。还有要看看primer的melting temperature
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3楼2011-12-17 23:41:34
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crush_bc

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这不是拖尾吧，这是p失败了，优化体系吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2011-12-17 23:49:21
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tttyyjj

铁杆木虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(应助指数-1): 无实际意义的应助回答！ 2011-12-21 10:18:13
调整参数，重做吧
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5楼2011-12-18 08:32:28
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dls1987

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-12-21 10:18:55
应该是PCR失败了。我们也做过这样的，最后都是重做。要是很亮的拖带还可以稀释了再跑，可是这个貌似不够亮。根本无法回收
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6楼2011-12-18 14:39:12
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fangxia1007

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by pophust at 2011-12-17 23:41:34:
PCR失败了。 感觉像是酶加少了。还有要看看primer的melting temperature

我是用混合没扩增的，50ul体系中加1UTaq和0.25Upfu聚合酶应该是够的啊！
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坚持吧
7楼2011-12-18 14:40:33
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sunjiutong

金虫 (著名写手)
内容已删除
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所谓梦想，只有醒来才有可能实现
8楼2011-12-18 21:11:50
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651894473
wanhscn: 多一些有意义的应助回帖，就有金币了，金币在该论坛上是有用的！ 2011-12-21 10:19:32
9楼2011-12-18 22:45:30
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jishidong

铜虫 (初入文坛)
可以考虑质粒DNA的浓度太高
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10楼2011-12-19 09:29:37
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