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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解释！PCR产物在目的区有很亮的拖尾！需要回收目的片段！怎么办啊?
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)
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11楼2011-12-19 20:16:40
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fangxia1007

金虫 (初入文坛)
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坚持吧
12楼2011-12-20 12:12:20
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cbjh100

金虫 (小有名气)
楼主用的两种taq酶在扩增2k以上的片段效果是不尽人意的，建议使用TAKARA的LA或者primer START ,另外可以降落PCR或者巢式PCR
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努力创造传奇，真诚寻找未来
13楼2011-12-20 13:21:39
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syn1985

木虫 (正式写手)
模板浓度高或者退火温度低了
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14楼2011-12-20 21:13:48
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sunjiutong

金虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by dovekaoyan at 2011-12-19 20:16:40:
PPT就可以做到，不用photoshop那么麻烦

谢谢！
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所谓梦想，只有醒来才有可能实现
15楼2011-12-20 22:53:40
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fangxia1007

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by cbjh100 at 2011-12-20 13:21:39:
楼主用的两种taq酶在扩增2k以上的片段效果是不尽人意的，建议使用TAKARA的LA或者primer START ,另外可以降落PCR或者巢式PCR

我之前是扩出来的条带很亮，但事后半个月条件一样都扩不出了；我试过TAKARA的LA结果还是不行非常弱的条带几乎看不见的情况；降落PCR也试过没有扩出也是如上图一样一片亮。
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坚持吧
16楼2011-12-21 09:50:30
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liukun261

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
17楼2012-03-02 23:00:04
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fwks3518

木虫 (正式写手)
1. PFU酶的扩增速度是600bp/秒，很显然，你的延伸时间太短！
2.  PFU酶不适合扩增过长片段。若非必要，请换用其他酶，或者是专门扩增长片段的taq酶。
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18楼2012-03-03 09:16:03
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fangxia1007

金虫 (初入文坛)
19楼2012-03-04 10:26:24
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txqjj

新虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励新虫交流！ 2012-03-07 12:18:46
提高退火温度，减少引物用量。重新提取质粒，建议提完后测一下质粒浓度。
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20楼2012-03-07 09:27:22
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