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求解释!PCR产物在目的区有很亮的拖尾!需要回收目的片段!怎么办啊?
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fangxia1007
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[
求助
]
求解释!PCR产物在目的区有很亮的拖尾!需要回收目的片段!怎么办啊?
我的片段5.1kb,PCR扩增跑胶成这样了,有严重的弥散拖尾,怎么回事!该怎样优化呢?求助大家出出主意
PCR扩增5.1kb基因电泳图
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2011-12-17 22:21:02
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fangxia1007
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楼
:
Originally posted by
cbjh100
at 2011-12-20 13:21:39:
楼主用的两种taq酶在扩增2k以上的片段效果是不尽人意的,建议使用TAKARA的LA或者primer START ,另外可以降落PCR或者巢式PCR
我之前是扩出来的条带很亮,但事后半个月条件一样都扩不出了;我试过TAKARA的LA结果还是不行非常弱的条带几乎看不见的情况;降落PCR也试过没有扩出也是如上图一样一片亮。
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坚持吧
16楼
2011-12-21 09:50:30
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fangxia1007(金币+3): 提高退火试过了还是没有!不过可以试试降落的 2011-12-18 14:37:23
你这应该是没有特异性扩增条带,建议考虑提高退火温度,或用降落PCR
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2楼
2011-12-17 22:59:23
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PCR失败了。 感觉像是酶加少了。还有要看看primer的melting temperature
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2011-12-17 23:41:34
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这不是拖尾吧,这是p失败了,优化体系吧
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼
2011-12-17 23:49:21
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