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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取，超螺旋前面还有一条带，怎么回事？
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取，超螺旋前面还有一条带，怎么回事？

各位大侠，我做过很多次质粒提取，有很多都出现超螺旋前面还有一条带的情况。我用的QIAGEN的试剂盒。是菌有问题吗？第二幅图的6、7、8孔是我自己用转化的菌，提得质粒，就没出现这种情况。有大侠遇到我这种情况的吗？

超螺旋前得杂带



超螺旋前得杂带

[ Last edited by silicare on 2014-2-17 at 12:01 ]
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1楼 2011-12-16 21:48:15
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回帖置顶 ( 共有1个 )

skkyy88888

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
5xiaosh: 回帖置顶 2011-12-20 14:22:01
5xiaosh(金币+2): 我重新提了一次，注意裂解时间，裂解液体积，只有两条带了，还是操作的问题。 2011-12-20 14:23:32
质粒提几条带无所谓的。关键是酶切以后是什么情况.提的时候力道不一样可能会有不同的结果.
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12楼2011-12-19 12:26:53
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普通回帖

5xiaosh

银虫 (小有名气)
是自己讲得不清楚吗 怎么没人回复
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2楼2011-12-17 12:53:28
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是原始菌种有一个较小的质粒污染，你重新转化后不是好了吗？，但我看还是都有那条小带。最好再做个酶切鉴定，确认是你的质粒
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3楼2011-12-17 15:59:15
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by panda73 at 2011-12-17 15:59:15:
可能是原始菌种有一个较小的质粒污染，你重新转化后不是好了吗？，但我看还是都有那条小带。最好再做个酶切鉴定，确认是你的质粒

谢谢您。我说的是3kb处的那条杂带，就是最下面的那条咋带。我们实验室我还没见过有这么小的质粒呀。我用的是别人的菌，她们已经提过质粒，没有这种情况且送去测序，是正确的。难道我拿过来用的时候，被我污染了？另外，有一次我们实验室的跟我一块提质粒，她出现这种情况了，我却提的挺好。
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4楼2011-12-17 17:18:46
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主这胶跑的……
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
5楼2011-12-18 10:01:51
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by dehong1573 at 2011-12-18 10:01:51:
楼主这胶跑的……

让您见笑了  可能是电泳缓冲液加多了  胶在里面歪了
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6楼2011-12-18 12:18:32
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
5xiaosh(金币+1): 谢谢（） 2011-12-20 14:28:38
单酶切或者双酶切直接验证就可以了。。。
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7楼2011-12-18 19:59:16
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 天使托 at 2011-12-18 19:59:16:
单酶切或者双酶切直接验证就可以了。。。

谢谢  今天去送去测序   我纳闷那条咋带是什么   如果说基因组DNA断了 也不应该都在3kb那个位置呀
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8楼2011-12-19 08:47:41
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 天使托 at 2011-12-18 19:59:16:
单酶切或者双酶切直接验证就可以了。。。

如果单酶切跑电泳 只有一条带  是不是说 前面那条咋带 是变性的超螺旋 ？
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9楼2011-12-19 09:04:24
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
5xiaosh(金币+2): 今天重提了，只有两条带。测序结果也出来了，比对一下。 2011-12-20 14:26:46
遇到过质粒提出来有“杂”带的情况，如果测序有问题说明菌有问题。重新转化吧。
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伟大航线....
10楼2011-12-19 09:16:15
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