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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取，超螺旋前面还有一条带，怎么回事？
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取，超螺旋前面还有一条带，怎么回事？

各位大侠，我做过很多次质粒提取，有很多都出现超螺旋前面还有一条带的情况。我用的QIAGEN的试剂盒。是菌有问题吗？第二幅图的6、7、8孔是我自己用转化的菌，提得质粒，就没出现这种情况。有大侠遇到我这种情况的吗？

超螺旋前得杂带



超螺旋前得杂带

[ Last edited by silicare on 2014-2-17 at 12:01 ]
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1楼 2011-12-16 21:48:15
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
是自己讲得不清楚吗 怎么没人回复
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2楼2011-12-17 12:53:28
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by panda73 at 2011-12-17 15:59:15:
可能是原始菌种有一个较小的质粒污染，你重新转化后不是好了吗？，但我看还是都有那条小带。最好再做个酶切鉴定，确认是你的质粒

谢谢您。我说的是3kb处的那条杂带，就是最下面的那条咋带。我们实验室我还没见过有这么小的质粒呀。我用的是别人的菌，她们已经提过质粒，没有这种情况且送去测序，是正确的。难道我拿过来用的时候，被我污染了？另外，有一次我们实验室的跟我一块提质粒，她出现这种情况了，我却提的挺好。
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4楼2011-12-17 17:18:46
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by dehong1573 at 2011-12-18 10:01:51:
楼主这胶跑的……

让您见笑了  可能是电泳缓冲液加多了  胶在里面歪了
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6楼2011-12-18 12:18:32
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 天使托 at 2011-12-18 19:59:16:
单酶切或者双酶切直接验证就可以了。。。

谢谢  今天去送去测序   我纳闷那条咋带是什么   如果说基因组DNA断了 也不应该都在3kb那个位置呀
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8楼2011-12-19 08:47:41
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 天使托 at 2011-12-18 19:59:16:
单酶切或者双酶切直接验证就可以了。。。

如果单酶切跑电泳 只有一条带  是不是说 前面那条咋带 是变性的超螺旋 ？
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9楼2011-12-19 09:04:24
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by longrna at 2011-12-19 09:16:15:
遇到过质粒提出来有“杂”带的情况，如果测序有问题说明菌有问题。重新转化吧。

嗯(⌒-⌒; )
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11楼2011-12-19 11:48:52
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by skkyy88888 at 2011-12-19 12:26:53:
质粒提几条带无所谓的。关键是酶切以后是什么情况.提的时候力道不一样可能会有不同的结果.

我们实验室都送去测序，我还没做过酶切实验…(−_−＃)
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13楼2011-12-19 12:34:40
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by xhy0016 at 2011-12-19 19:29:08:
这种杂带的话，一般是由原始宿主菌自带的质粒引起的，比如说，Rosetta这个表达菌株就有自己的质粒，应该没有问题的，呵呵

谢谢，您的观点很新颖，我确实不知道我们实验室所用的菌种都有哪些，我想当然的以为都是DH5a。不过别人提的时候没这种情况的…(^_^*)
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15楼2011-12-19 19:44:59
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