24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 5252  |  回复: 31
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 用过pET28a(+)表达载体的高人请指教

本人合成了一段全基因序列,连接表达载体pET28a(+),因为第一次做,错误的选择了EcoR1和Hind3作为酶切位点(红色标记),这样表达出的目的蛋白就会带有大量的载体氨基酸(蓝色框),影响活性。不知道哪位高人能够指点一些,该怎样处理才能保证蛋白活性?谢谢!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物技术 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+1): 2011-12-12 17:07:17
都克隆了,就一直走下去,一般多几个氨基酸不会影响活性。
有问题再重新PCR一下,不用千元以上吧
9楼2011-12-12 16:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 32 个回答

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:29:40
重新构建吧,要除去这个貌似要酶切啥的
另外,一般这些tag对活性不会有非常大的影响?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2011-12-12 16:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:31:04
先做了看看活性,没有活性的话重新构建,换酶切位点NcoI(也会多两个氨基酸),或者换载体。
3楼2011-12-12 16:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海豚荣

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:33:09
28a可以构建C端和N端的蛋白融合,酶切位点我们一般都不会选hind3的
乌托邦
4楼2011-12-12 16:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 急需调剂 +7 绝不放弃22 2026-04-15 8/400 2026-04-17 23:54 by 绝不放弃22
[考研] 求调剂 +9 小聂爱学习 2026-04-16 11/550 2026-04-17 22:34 by chixmc
[考博] 求博导|生物质基多孔碳/超级电容方向,已有相关成果,寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[考研] 294求调剂 +7 淡然654321 2026-04-17 8/400 2026-04-17 16:36 by wutongshun
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +4 qut2026 2026-04-11 8/400 2026-04-17 16:10 by 会飞的猪157
[考研] 300求调剂 +11 橙a777 2026-04-15 11/550 2026-04-16 22:43 by cfdbai
[考研] 22408 312求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-14 25/1250 2026-04-16 21:21 by Art1977
[考研] 294求调剂 +14 淡然654321 2026-04-15 14/700 2026-04-16 21:01 by lpl364211
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 药学305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-15 13:21 by 西北望—风沙
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 食品与营养(0955)271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 求调剂,985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 346分,工科0854求调剂,专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 359求调剂 +5 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 19:55 by lbsjt
信息提示
请填处理意见