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月月大可

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-12-13 19:03:38
我一般使用Nde I酶切位点,这是能发挥his tag 功能又尽可能减少外援氨基酸的最优做法。但蛋白亲和层析阶段我还可以使用 凝血酶 将N段的his tag 切除。这样相当于同时进行了亲和层析纯化后再使用蛋白酶进行特异选择,一步下来即可获得极高纯度的目的蛋白。

看了楼主的回复,感觉是个外行人(我说话直)。
仅仅重新设计引物,更换酶切位点即可。不知道你在下游引入终止密码子没有,如果没有引入,这样目的蛋白就会在两端都带标签。
如果你根本不想用his tag,仅仅是用载体表达,你可以把上游酶切位点用Nco I。
21楼2011-12-12 19:56:58
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