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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 用过pET28a(+)表达载体的高人请指教

本人合成了一段全基因序列,连接表达载体pET28a(+),因为第一次做,错误的选择了EcoR1和Hind3作为酶切位点(红色标记),这样表达出的目的蛋白就会带有大量的载体氨基酸(蓝色框),影响活性。不知道哪位高人能够指点一些,该怎样处理才能保证蛋白活性?谢谢!!
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海豚荣

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:33:09
28a可以构建C端和N端的蛋白融合,酶切位点我们一般都不会选hind3的
乌托邦
4楼2011-12-12 16:27:08
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:29:40
重新构建吧,要除去这个貌似要酶切啥的
另外,一般这些tag对活性不会有非常大的影响?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2011-12-12 16:15:36
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:31:04
先做了看看活性,没有活性的话重新构建,换酶切位点NcoI(也会多两个氨基酸),或者换载体。
3楼2011-12-12 16:17:44
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by shaquila at 2011-12-12 16:15:36:
重新构建吧,要除去这个貌似要酶切啥的
另外,一般这些tag对活性不会有非常大的影响?

重新构建话费可大了,数千银子呢
5楼2011-12-12 16:29:27
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