24小时热门版块排行榜    

查看: 5705  |  回复: 31
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 用过pET28a(+)表达载体的高人请指教

本人合成了一段全基因序列,连接表达载体pET28a(+),因为第一次做,错误的选择了EcoR1和Hind3作为酶切位点(红色标记),这样表达出的目的蛋白就会带有大量的载体氨基酸(蓝色框),影响活性。不知道哪位高人能够指点一些,该怎样处理才能保证蛋白活性?谢谢!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物技术 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

joan198108(金币+1): 2011-12-12 17:06:15
不用那么多钱吧,就是引物设计下,PCR下,就是内切酶贵点,不用很多钱吧。。
只要改一个5端用NcoI,其它可以不变
8楼2011-12-12 16:35:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 32 个回答

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:29:40
重新构建吧,要除去这个貌似要酶切啥的
另外,一般这些tag对活性不会有非常大的影响?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2011-12-12 16:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:31:04
先做了看看活性,没有活性的话重新构建,换酶切位点NcoI(也会多两个氨基酸),或者换载体。
3楼2011-12-12 16:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海豚荣

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
joan198108(金币+2): 2011-12-12 16:33:09
28a可以构建C端和N端的蛋白融合,酶切位点我们一般都不会选hind3的
乌托邦
4楼2011-12-12 16:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 我面上完蛋了 +11 且听虎啸 2026-08-20 12/600 2026-08-25 07:53 by bugaboo
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 8/400 2026-08-25 05:12 by BZKMTicpDhFj
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见