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XUMIN6891金虫 (初入文坛)
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请教一下连接与转化问题！
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| 各位大侠你们好！我想请教一下一个问题，我现在做的是串联表达，我是先分别扩增两段长度一样的串联片段，并且串联片段的序列都是重复的，然后我在这两段串联片段设计一个相同的限制性内切酶，目的是通过这个酶把这两段串联的片段连接起来，这样的话，我串联的长度就延长了，我现在时扩增的两段片段也都扩出来了，两段片段的大小都是350bp左右，然后双酶切，第一段片段我用ECORI和Sal I双酶切，第二段我用Sal I和Xhol I双酶切，条带也都有，然后我把这两段双酶切回收的产物和PET-30a（+）载体双酶切【载体用ECORI，Xhol I双酶切回收】这三段我在一个体系里面连接，然后转化，但是最后我挑菌进行pcr鉴定扩出来的条带大小只有350bp多，按说连上应该是680bp多，双酶切鉴定也没有那条目的条带的条带，这样不是说我没连上吗，这样的话我应该怎样改进啊？请各位指导一下！谢谢！我以前做出来的一段串联片段也是按这种方法做的，测序也都正确！ |
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