| 查看: 1237 | 回复: 0 | |||
tianhuijuan金虫 (小有名气)
|
[求助]
nest-PCR引物设计的问题
|
|
如题。nest-PCR，模板：猪肝中提取RNA，反转录成cDNA, DNA双链补平后与复性的marathon 16℃过夜连接。其中DNA双链经之前成功的引物验证过有条带。手动设计的引物如下： 外侧引物： thjAP1（f） 5′-CCATCCTAATACGACTCAC-3′ primer A (r) 5′-CAC CAT TgT CAA Tgg TgA gA-3′ 内侧引物： thjAP2(f) 5′-GGCCGGATCCTATAGGGCTCGAGCGGC-3′ primer B(r) 5′-CCg CCg CTC gAg Tgg TAC AgT AAC AAC TgC AT-3′ 循环条件： Stage 1 Step 1 95℃ 5 min ×1 cycle Stage 2 Step 1 93℃ 40 sec Step 2 56℃ 60 sec × 29 cycles Step 3 72℃ 60 sec Stage 3 Step 1 93℃ 40 sec Step 2 56℃ 60 sec ×1 cycle Step 3 72℃ 20 min Hold at 12℃ 其中，退火温度和延伸时间都做过调整，均没有改善，都是只有引物间的二聚体。 请教高手虫友们，引物是否存在问题，亦或是其它的问题呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有291人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
PCR引物设计的问题
已经有8人回复
- 这样的电泳条带能测序吗？
已经有17人回复
- 5‘Race扩不出带，求高手指点
已经有12人回复
- 【求助/交流】引物设计信息如此，touchdownPCR如何设计？
已经有7人回复
- 【求助/交流】3'RACE 结果有问题～～～
已经有8人回复
- 【求助/交流】pCR引物设计的详细规则
已经有7人回复
- 【求助/交流】土壤细菌多样性，引物F357GC R518 PCR老是出问题，求救！
已经有11人回复
- 【求助/交流】细菌V3区PCR出现问题，引物为357和518，用于DGGE！
已经有8人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR引物跨内含子的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带
已经有39人回复
- 【求助/交流】问个问题,测PCR产物序列的时候会不会测出引物的序列?
已经有16人回复
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）
已经有28人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
