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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳跑的问题

我做了一个病毒的蛋白电泳,每次跑的时间都在4小时以上,而且跑不到头,我发现在开始的2个小时的时候还算正常(一般跑到分离胶的一般),后来就越跑越慢了,请高手指点一下,顺便说一下,我有了以下2种跑的方案:
1.浓缩胶:电压70伏  电流70多  时间30-40分钟   分离胶:电压120伏  120多
2..浓缩胶:电压70伏  电流70多 时间30-40分钟   分离胶:电压100伏   电流100左右  电压120伏 120多
  
我跑完后就用考马斯亮蓝染色液染30分钟,然后脱色几个小时,发现电泳条带不清楚而且条带也少,以下是我的电泳图,多谢高手指点了

[ Last edited by zhang8826857 on 2011-12-3 at 08:57 ]
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  • 2011-11-25 20:32:58, 769.05 K

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

这个图我试图下了5次都下不来。你直接将图贴出来,别用附件。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-25 21:24:45
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 21:24:45:
这个图我试图下了5次都下不来。你直接将图贴出来,别用附件。

我这个图片是BMP形式的,以图片的形式传不上去,不是用相机照的,真的不好意思
3楼2011-11-26 11:04:31
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)

我再试试

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  • 附件 1 : 20111125-3(2).BMP
  • 2011-11-26 11:09:57, 769.05 K
4楼2011-11-26 11:10:16
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 21:24:45:
这个图我试图下了5次都下不来。你直接将图贴出来,别用附件。

我又传了一次,然后试着下载了,麻烦你再下一次,帮我看看问题的原因吧,万分感谢了
5楼2011-11-26 11:15:22
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

YJD落叶梧桐(金币+3): 2011-11-26 11:52:33
引用回帖:
3楼: Originally posted by YJD落叶梧桐 at 2011-11-26 11:04:31:
我这个图片是BMP形式的,以图片的形式传不上去,不是用相机照的,真的不好意思

终于打开它了。扫胶扫的太差了,而且你连marker是哪个都不标。我不知道你的病毒在感染细胞之后收集的时候是否纯化了,纯度在镜检的时候是否足够。

我找了篇PLOS pathogen上面的文章,你自己可以将方法对比一下。不知道你的病毒蛋白是否经过去糖基化,有可能是糖基太多造成电泳拖尾明显。

文章标题:Cellular Proteins in Influenza Virus Particles。

图:lane1 为未经处理的蛋白;lane2为去糖基化的蛋白。

The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2011-11-26 11:25:47
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
对于去糖基化这个我不太理解,是否能说的详细点,谢谢了
7楼2011-11-26 11:54:39
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xuwei119

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

YJD落叶梧桐(金币+1): 谢谢,我找到原因了 2011-11-30 22:17:40
这胶跑的太烂了,肯定是电泳的问题。开始正常两个钟后就不行,是不是你的内槽漏液啊,同时外槽液加太满造成连通。因为电流相对电压来说实在有点高
8楼2011-11-30 17:22:16
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

YJD落叶梧桐(金币+1): 谢谢回帖,我找到原因了 2011-12-03 11:53:24
你电泳槽出问题了漏液了应该是。电压电流不可能一样的
9楼2011-12-02 23:52:48
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-26 11:25:47:
终于打开它了。扫胶扫的太差了,而且你连marker是哪个都不标。我不知道你的病毒在感染细胞之后收集的时候是否纯化了,纯度在镜检的时候是否足够。

我找了篇PLOS pathogen上面的文章,你自己可以将方法对比一下 ...

您好:我想问一下您蛋白质去糖基化用什么方法呀?如何能把蛋白质糖基去掉?能不能把蛋白质上的糖链收集起来呢?
10楼2011-12-02 23:55:19
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