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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 蛋白电泳跑的问题
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳跑的问题

我做了一个病毒的蛋白电泳，每次跑的时间都在4小时以上，而且跑不到头，我发现在开始的2个小时的时候还算正常（一般跑到分离胶的一般），后来就越跑越慢了，请高手指点一下，顺便说一下，我有了以下2种跑的方案：
1.浓缩胶：电压70伏  电流70多  时间30-40分钟   分离胶：电压120伏  120多
2..浓缩胶：电压70伏  电流70多 时间30-40分钟   分离胶：电压100伏   电流100左右  电压120伏 120多
  
我跑完后就用考马斯亮蓝染色液染30分钟，然后脱色几个小时，发现电泳条带不清楚而且条带也少，以下是我的电泳图，多谢高手指点了

[ Last edited by zhang8826857 on 2011-12-3 at 08:57 ]
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    • 2011-11-25 20:32:58, 769.05 K

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YJD落叶梧桐

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1楼 2011-11-25 20:33:33
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
这个图我试图下了5次都下不来。你直接将图贴出来，别用附件。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-25 21:24:45
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 21:24:45:
这个图我试图下了5次都下不来。你直接将图贴出来，别用附件。

我这个图片是BMP形式的，以图片的形式传不上去，不是用相机照的，真的不好意思
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3楼2011-11-26 11:04:31
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)
我再试试
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    • 2011-11-26 11:09:57, 769.05 K
4楼2011-11-26 11:10:16
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 21:24:45:
这个图我试图下了5次都下不来。你直接将图贴出来，别用附件。

我又传了一次，然后试着下载了，麻烦你再下一次，帮我看看问题的原因吧，万分感谢了
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5楼2011-11-26 11:15:22
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

YJD落叶梧桐(金币+3): 2011-11-26 11:52:33
引用回帖:
3楼: Originally posted by YJD落叶梧桐 at 2011-11-26 11:04:31:
我这个图片是BMP形式的，以图片的形式传不上去，不是用相机照的，真的不好意思

终于打开它了。扫胶扫的太差了，而且你连marker是哪个都不标。我不知道你的病毒在感染细胞之后收集的时候是否纯化了，纯度在镜检的时候是否足够。

我找了篇PLOS pathogen上面的文章，你自己可以将方法对比一下。不知道你的病毒蛋白是否经过去糖基化，有可能是糖基太多造成电泳拖尾明显。

文章标题：Cellular Proteins in Influenza Virus Particles。

图：lane1 为未经处理的蛋白；lane2为去糖基化的蛋白。
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6楼2011-11-26 11:25:47
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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
对于去糖基化这个我不太理解，是否能说的详细点，谢谢了
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7楼2011-11-26 11:54:39
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xuwei119

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

YJD落叶梧桐(金币+1): 谢谢，我找到原因了 2011-11-30 22:17:40
这胶跑的太烂了，肯定是电泳的问题。开始正常两个钟后就不行，是不是你的内槽漏液啊，同时外槽液加太满造成连通。因为电流相对电压来说实在有点高
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8楼2011-11-30 17:22:16
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

YJD落叶梧桐(金币+1): 谢谢回帖，我找到原因了 2011-12-03 11:53:24
你电泳槽出问题了漏液了应该是。电压电流不可能一样的
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9楼2011-12-02 23:52:48
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-26 11:25:47:
终于打开它了。扫胶扫的太差了，而且你连marker是哪个都不标。我不知道你的病毒在感染细胞之后收集的时候是否纯化了，纯度在镜检的时候是否足够。

我找了篇PLOS pathogen上面的文章，你自己可以将方法对比一下 ...

您好：我想问一下您蛋白质去糖基化用什么方法呀？如何能把蛋白质糖基去掉？能不能把蛋白质上的糖链收集起来呢？
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10楼2011-12-02 23:55:19
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