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RT-PCR扩增图和溶解曲线跑成这样
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月之光羽
木虫
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虫号: 841488
[交流]
RT-PCR扩增图和溶解曲线跑成这样
各位虫友,
最近做RT-PCR,扩增图和溶解曲线跑成这样,我的退火温度为57度,不知道怎么回事,同样的条件,其它的做的挺好的,就是这几个样是这样,求帮忙!
扩增
溶解曲线
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1楼
2011-11-20 20:20:09
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xiaomage9527
金虫
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虫号: 1055033
★
月之光羽(金币
+1
):谢谢参与
上图的荧光曲线碰到过 那是用ABI 7500fast仪器, Fermentas的SYBR Green做的,重复了几次都是那样(最开始有过一次正常的,仅一次而已),后来换了ABI的SYBR做,再没出现这种情况,(要么是正常有检测到,要么是CT值靠后,要么没检测信号,这些都是正常的结果),我觉得很可能是所用试剂(SYBR Green MIX)的问题
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6楼
2011-11-22 10:32:38
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blackrose8089
铁杆木虫
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虫号: 614948
★
月之光羽(金币
+1
):谢谢参与
如果模板都一样的话,机子没问题,应该是引物的事情。
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2楼
2011-11-20 21:33:50
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wuyucool
铁杆木虫
(著名写手)
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帖子: 1326
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虫号: 847819
★
月之光羽(金币
+1
):谢谢参与
看一下转录组数据,这几个基因表达的情况如何? 引物做PCR结果如何?
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3楼
2011-11-20 21:46:05
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月之光羽
木虫
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虫号: 841488
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2楼
:
Originally posted by
blackrose8089
at 2011-11-20 21:33:50:
如果模板都一样的话,机子没问题,应该是引物的事情。
我做了6个模板,同时做了6个基因,其中第2个模板的都是这种情况,并且都没有给出CT值,还有两个模板的3个基因也是这种情况,另外的都很好,剩下3个模板的6个基因都很好,所以引物估计没问题,是退火温度还是其它?
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4楼
2011-11-20 21:56:59
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