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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR扩增图和溶解曲线跑成这样
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月之光羽

木虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR扩增图和溶解曲线跑成这样

各位虫友，
       最近做RT-PCR，扩增图和溶解曲线跑成这样，我的退火温度为57度，不知道怎么回事，同样的条件，其它的做的挺好的，就是这几个样是这样，求帮忙！

扩增



溶解曲线
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1楼 2011-11-20 20:20:09
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xiaomage9527

金虫 (正式写手)
★
月之光羽(金币+1):谢谢参与
上图的荧光曲线碰到过    那是用ABI 7500fast仪器， Fermentas的SYBR Green做的，重复了几次都是那样（最开始有过一次正常的，仅一次而已），后来换了ABI的SYBR做，再没出现这种情况，（要么是正常有检测到，要么是CT值靠后，要么没检测信号，这些都是正常的结果），我觉得很可能是所用试剂（SYBR Green MIX）的问题
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6楼2011-11-22 10:32:38
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
月之光羽(金币+1):谢谢参与
如果模板都一样的话，机子没问题，应该是引物的事情。
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2楼2011-11-20 21:33:50
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wuyucool

铁杆木虫 (著名写手)
★
月之光羽(金币+1):谢谢参与
看一下转录组数据，这几个基因表达的情况如何？ 引物做PCR结果如何？
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3楼2011-11-20 21:46:05
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月之光羽

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-20 21:33:50:
如果模板都一样的话，机子没问题，应该是引物的事情。

我做了6个模板，同时做了6个基因，其中第2个模板的都是这种情况，并且都没有给出CT值，还有两个模板的3个基因也是这种情况，另外的都很好，剩下3个模板的6个基因都很好，所以引物估计没问题，是退火温度还是其它？
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4楼2011-11-20 21:56:59
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