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月之光羽

木虫 (小有名气)


[交流] RT-PCR扩增图和溶解曲线跑成这样

各位虫友,
       最近做RT-PCR,扩增图和溶解曲线跑成这样,我的退火温度为57度,不知道怎么回事,同样的条件,其它的做的挺好的,就是这几个样是这样,求帮忙!

扩增



溶解曲线
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xiaomage9527

金虫 (正式写手)



月之光羽(金币+1):谢谢参与
上图的荧光曲线碰到过    那是用ABI 7500fast仪器, Fermentas的SYBR Green做的,重复了几次都是那样(最开始有过一次正常的,仅一次而已),后来换了ABI的SYBR做,再没出现这种情况,(要么是正常有检测到,要么是CT值靠后,要么没检测信号,这些都是正常的结果),我觉得很可能是所用试剂(SYBR Green MIX)的问题
6楼2011-11-22 10:32:38
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查看全部 13 个回答

月之光羽(金币+1):谢谢参与
如果模板都一样的话,机子没问题,应该是引物的事情。
2楼2011-11-20 21:33:50
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wuyucool

铁杆木虫 (著名写手)



月之光羽(金币+1):谢谢参与
看一下转录组数据,这几个基因表达的情况如何? 引物做PCR结果如何?
3楼2011-11-20 21:46:05
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月之光羽

木虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-20 21:33:50:
如果模板都一样的话,机子没问题,应该是引物的事情。

我做了6个模板,同时做了6个基因,其中第2个模板的都是这种情况,并且都没有给出CT值,还有两个模板的3个基因也是这种情况,另外的都很好,剩下3个模板的6个基因都很好,所以引物估计没问题,是退火温度还是其它?
4楼2011-11-20 21:56:59
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