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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题,基因片段3.7Kb载体7Kb,Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆,要么长出来也是假阳性,小提质粒后酶切片段大小不对额
大片段不好连呢,求高手指教有妙招改进么??
(转化采用的超级感受态细胞,42度30s)
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longrna

新虫 (正式写手)

我们一般4度过夜连接,用NEB的酶
伟大航线....
3楼2011-11-17 18:10:05
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longrna

新虫 (正式写手)

贴上你的连接体系及条件嘛,用哪家公司的酶?
伟大航线....
2楼2011-11-17 18:06:25
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 18:06:25:
贴上你的连接体系及条件嘛,用哪家公司的酶?

takara的连接酶,16度过夜的
许多奇迹,我们相信,才会实现……
4楼2011-11-17 18:34:36
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longrna

新虫 (正式写手)


西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-11-17 21:37:34
Takara的酶不是很清楚,我们用NEB的话,一般16度一个小时或4度过夜(效率差不多)。
把载体及连接片段的比例再调整调整,我觉得只是效率问题,不可能一点都连不上的,除非连接酶有问题。
伟大航线....
5楼2011-11-17 19:42:01
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