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笔冰河

银虫 (小有名气)

[求助] 克隆过程出现的问题

目的片段连接TA载体,转化后平板挑单克隆菌落PCR鉴定,摇菌分装,一管测序,一管提质粒PCR,结果却不一样,测序结果是单一的,PCR结果不单一,请教原因。PCR和测序过程不一样吗?
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

笔冰河(金币+1): 谢谢! 2011-11-15 11:33:48
肯定有可能的,测序公司的引物一般是通用引物,特异性很好,而你用的引物条件可能没有调到最好,所以出现非特异带,不过只要有目的片段大小的条带出现,酶切鉴定又没问题得话没什么大碍
5楼2011-11-15 06:59:01
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 同意! 2011-11-14 16:21:15
楼主摇菌时会不会污染,再有菌落PCR假阳性很高,楼主可以酶切验证一下,
jiayoubashaonian
2楼2011-11-14 11:50:13
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

笔冰河(金币+1): 谢谢! 2011-11-15 11:36:23
连T载体,一般很容易的。
保险起见,单菌落PCR之后还是提质粒酶切一下再测序。
3楼2011-11-14 15:06:04
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

还有种情况,就是公司把样弄错了!
我们以前送小麦的BAC,结果出来的是水稻的,后来他们帮我们重新测!
不点名该公司!
真相是最大的奢侈品
4楼2011-11-14 16:22:39
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