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wx1119

铜虫 (小有名气)

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[求助] DGGE扩增问题

各位大侠，本人扩增DGGE V3区用的是B357-GC和B517，已经做了2个多月，但是一直扩增不出来片段，用不带GC夹的就能狗扩增出来！
PCR条件：95  10min
               93 30s
               52 45s
               72 1min
               30个循环
      72 5min
总基因组DNA是沼气发酵过程中的样品DNA

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1楼 2011-11-04 16:37:05

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wx1119

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 老夏853 at 2011-11-08 16:38:50:
我说几点你可以参考参考
1  模板成分复杂，做的时候要稀释，稀释多少梯度摸索
2  增加PCR 保护剂  BSA 吐温20  DMSO 等
3  你这个反应程序 ~~~  预变性时间太长可能会让DNA 聚合酶失效，94°，5min 或者 ...

1、TD-PCR我也做过但是也没p出来
2、增加PCR 保护剂 BSA ，加多少呢，这个没用过，只是酶切的时候用过，PCR没做过，50微的体系怎么加，浓度多少。
3、模板成分也稀释过，*10，*100的都弄过，可是……
哎！悲催呀！