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wx1119

铜虫 (小有名气)

[求助] DGGE扩增问题

各位大侠,本人扩增DGGE V3区用的是B357-GC和B517,已经做了2个多月,但是一直扩增不出来片段,用不带GC夹的就能狗扩增出来!
PCR条件:95  10min
                 93   30s
                 52   45s
                 72   1min
                 30个循环
          72   5min
总基因组DNA是沼气发酵过程中的样品DNA
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wx1119

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yyz1001 at 2011-11-09 01:46:07:
LZ别着急,DGGE是需要不停地摸条件的~加油加油!
BSA我做细菌是不加的,真菌的时候加0.25。
不过我同意楼上童鞋的意见,你的预变性太长啦,5min足够啦~
话说你带GC夹PCR以后琼脂糖电泳有条带么?

DNA  1
357-GC   0.5
517        0.5
Taq        0.5
Buffer     5
DNTP     4
体系是50的
我的DNTP的浓度是2.5nM的,Taq酶是TAKALA的,和Buffer是一套的。
10楼2011-11-09 09:17:35
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查看全部 11 个回答

范慧

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): 鼓励新虫应助回帖! 2011-11-06 08:23:31
DGGE是梯度凝胶电泳
PCR是扩增
一般是先用带GC夹子的引物扩增出条带
再用扩增出来的条带做DGGE
2楼2011-11-05 13:17:03
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陈青chenqing

铜虫 (初入文坛)

预变性的时间为什么和变性的时间不一样呢?
自己的未来自己创造!
3楼2011-11-05 13:56:20
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wx1119

铜虫 (小有名气)

wanhscn: 交流是兴趣! 2011-11-08 08:55:49
请给出正面的解决办法
4楼2011-11-07 15:54:55
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