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笔冰河

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 212
红花: 1
帖子: 139
在线: 44.6小时
虫号: 1111763
注册: 2010-09-30
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 目的片段与表达载体的连接

1kb的目的片段与PET-19b连接，转化DH5a，平板培养16小时无菌落。做了空载体转化的对照，14小时平板菌落长得很好，也就是问题出在连接，怎么优化连接呢，有什么需要注意的？
PS: 连接体系 14μl 目的片段，3μl 酶切载体，2μl buffer，1μl T4连接酶。（带有目的片段的T载体和PET载体都是用试剂盒提，使用相同的酶切体系）

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1楼2011-11-02 10:48:22

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heroyl

木虫 (正式写手)

应助: 19 (小学生)
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帖子: 465
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虫号: 1122022
注册: 2010-10-14
性别: MM
专业: 动物遗传学

【答案】应助回帖

连接温度呢？时间？

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实验虐我千百遍，我待实验如初恋

14楼2011-11-03 18:53:25

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