应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的片段与表达载体的连接
52/1返回列表
查看: 5898  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

笔冰河

银虫 (小有名气)

[求助] 目的片段与表达载体的连接

1kb的目的片段与PET-19b连接，转化DH5a，平板培养16小时无菌落。做了空载体转化的对照，14小时平板菌落长得很好，也就是问题出在连接，怎么优化连接呢，有什么需要注意的？
PS: 连接体系 14μl 目的片段，3μl 酶切载体，2μl buffer，1μl T4连接酶。（带有目的片段的T载体和PET载体都是用试剂盒提，使用相同的酶切体系）
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2011-11-02 10:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

连接温度呢？时间？
赞一下(1人) 回复此楼
实验虐我千百遍，我待实验如初恋
14楼2011-11-03 18:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助回帖!应助更多有奖励! 2011-11-02 11:44:47
连接前应该跑个琼脂糖确定目的基因和载体之间的浓度比，在通过计算使得两者摩尔量之比在8：1左右。
赞一下(1人) 回复此楼
悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
2楼2011-11-02 10:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笔冰河

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by imyting at 2011-11-02 10:54:15:
连接前应该跑个琼脂糖确定目的基因和载体之间的浓度比，在通过计算使得两者摩尔量之比在8：1左右。

跑了电泳，亮度差不多，是按目的片段：载体摩尔比约为10:1连接，试了两次就是长不出来，不知道是哪里出了问题
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-11-02 11:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)
★
wanhscn(金币+1): 热心! 2011-11-02 12:06:26
是不是酶切出问题了啊，你质粒酶切后跑胶有几条带，是双酶切还单酶切？
赞一下(1人) 回复此楼
悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
4楼2011-11-02 11:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭