应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做限制性酶切，请帮忙分析下
111/2返回列表12下一页
查看: 2236  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

静海

新虫 (小有名气)

[求助] 做限制性酶切，请帮忙分析下

第一次做限制性酶切，请大家帮忙分析下(*^__^*) 嘻嘻……
marker是5000。载体是3号是我的条带。我想教一下，
1.我的有4条带，从离加样孔最近的是不是依次为：载体、空载体、目的基因、杂质？
2.理想的情况是3条带么？跑的最慢的那条是未切的载体，亮度较小。其次是空载体和目的基因条带，亮度较大且二者相近。
3.从亮度来看，1、3条带和2、4、5有较大区别，是因为？
4.怎么改进呢？最大的问题是？
O(∩_∩)O谢谢~~~

限制酶切电泳图

[ Last edited by 1949stone on 2011-10-31 at 21:51 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-31 18:46:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
我觉得你应该把每个泳道对应点的样品是什么，要说清楚。
不然不好分析。
赞一下 回复此楼
2楼2011-11-01 12:59:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子生物化学

金虫 (小有名气)

实验菜鸟

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-11-01 17:56:40
限制性内切酶在最佳环境在可以只切单一酶切位点，但是如果环境不适宜，它也有可能去切其他限制性内切酶的酶切位点，我估计你酶切条件不对，请参照酶的说明书改一下酶切条件。
赞一下(1人) 回复此楼
做实验有失败才能学到东西
3楼2011-11-01 15:58:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jingdejun at 2011-11-01 12:59:08:
我觉得你应该把每个泳道对应点的样品是什么，要说清楚。
不然不好分析。

做的是公共实验，只有3号的加样孔是我的样。质粒是pMD19-T。用的两种限制性酶：HindIII、EcoRI.
赞一下 回复此楼
4楼2011-11-02 19:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 分子生物化学 at 2011-11-01 15:58:05:
限制性内切酶在最佳环境在可以只切单一酶切位点，但是如果环境不适宜，它也有可能去切其他限制性内切酶的酶切位点，我估计你酶切条件不对，请参照酶的说明书改一下酶切条件。

你指的是酶的星活性是么？如果出去这个原因，还有可能是别的不？
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-02 21:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静海

新虫 (小有名气)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流！ 2011-11-02 21:24:00
引用回帖:
3楼: Originally posted by 分子生物化学 at 2011-11-01 15:58:05:
限制性内切酶在最佳环境在可以只切单一酶切位点，但是如果环境不适宜，它也有可能去切其他限制性内切酶的酶切位点，我估计你酶切条件不对，请参照酶的说明书改一下酶切条件。

你指的是酶的星活性是么？如果除去这个原因，还有可能是别的不？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-11-02 21:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dream-fish

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

静海(金币+1): 2011-11-16 00:49:17
你做的是双酶切，那么我就理解为你是打算做了酶切之后连接到其他载体上面去。但是你的空载体是什么呢？如果也是pmd18-T那么，我认为你的酶切是完全失败的。T载体是不会切出三条带的。一般做双酶切，就是两条带。
赞一下 回复此楼
7楼2011-11-03 13:06:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by dream-fish at 2011-11-03 13:06:55:
你做的是双酶切，那么我就理解为你是打算做了酶切之后连接到其他载体上面去。但是你的空载体是什么呢？如果也是pmd18-T那么，我认为你的酶切是完全失败的。T载体是不会切出三条带的。一般做双酶切，就是两条带。

好受打击啊，做这个是想做个验证~~我现在刚开始接触，还是不太明白~~
赞一下 回复此楼
8楼2011-11-06 15:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dream-fish

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 静海 at 2011-11-06 15:29:22:
好受打击啊，做这个是想做个验证~~我现在刚开始接触，还是不太明白~~

这个可能是因为你基因内部有你用的酶的位点。用软件先认真分析下，或者把T载体送测序。
赞一下 回复此楼
9楼2011-11-16 14:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blastfeng

金虫 (正式写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-17 00:09:38
既然是公共实验，要求不是很严格，不到你的酶切条件是什么，16摄氏度四小时还是过夜，主要在操作上，有时候很小的细节操作造成实验结果不同是很正常的，比如吹打次数上的不同
赞一下(1人) 回复此楼
生活就像PCR
10楼2011-11-16 17:37:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 静海 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 11/550 2026-11-09 05:15 by l48hFd8Nwae2
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 11/550 2026-11-09 04:16 by l48hFd8Nwae2
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 11/550 2026-11-09 00:26 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 21:29 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 23/1150 2026-11-07 06:49 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭