应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做限制性酶切，请帮忙分析下
111/2返回列表12下一页
查看: 1757  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

静海

新虫 (小有名气)

[求助] 做限制性酶切，请帮忙分析下

第一次做限制性酶切，请大家帮忙分析下(*^__^*) 嘻嘻……
marker是5000。载体是3号是我的条带。我想教一下，
1.我的有4条带，从离加样孔最近的是不是依次为：载体、空载体、目的基因、杂质？
2.理想的情况是3条带么？跑的最慢的那条是未切的载体，亮度较小。其次是空载体和目的基因条带，亮度较大且二者相近。
3.从亮度来看，1、3条带和2、4、5有较大区别，是因为？
4.怎么改进呢？最大的问题是？
O(∩_∩)O谢谢~~~

限制酶切电泳图

[ Last edited by 1949stone on 2011-10-31 at 21:51 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-31 18:46:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
我觉得你应该把每个泳道对应点的样品是什么，要说清楚。
不然不好分析。
赞一下 回复此楼
2楼2011-11-01 12:59:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子生物化学

金虫 (小有名气)

实验菜鸟

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-11-01 17:56:40
限制性内切酶在最佳环境在可以只切单一酶切位点，但是如果环境不适宜，它也有可能去切其他限制性内切酶的酶切位点，我估计你酶切条件不对，请参照酶的说明书改一下酶切条件。
赞一下(1人) 回复此楼
做实验有失败才能学到东西
3楼2011-11-01 15:58:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jingdejun at 2011-11-01 12:59:08:
我觉得你应该把每个泳道对应点的样品是什么，要说清楚。
不然不好分析。

做的是公共实验，只有3号的加样孔是我的样。质粒是pMD19-T。用的两种限制性酶：HindIII、EcoRI.
赞一下 回复此楼
4楼2011-11-02 19:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 分子生物化学 at 2011-11-01 15:58:05:
限制性内切酶在最佳环境在可以只切单一酶切位点，但是如果环境不适宜，它也有可能去切其他限制性内切酶的酶切位点，我估计你酶切条件不对，请参照酶的说明书改一下酶切条件。

你指的是酶的星活性是么？如果出去这个原因，还有可能是别的不？
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-02 21:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静海

新虫 (小有名气)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流！ 2011-11-02 21:24:00
引用回帖:
3楼: Originally posted by 分子生物化学 at 2011-11-01 15:58:05:
限制性内切酶在最佳环境在可以只切单一酶切位点，但是如果环境不适宜，它也有可能去切其他限制性内切酶的酶切位点，我估计你酶切条件不对，请参照酶的说明书改一下酶切条件。

你指的是酶的星活性是么？如果除去这个原因，还有可能是别的不？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-11-02 21:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dream-fish

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

静海(金币+1): 2011-11-16 00:49:17
你做的是双酶切，那么我就理解为你是打算做了酶切之后连接到其他载体上面去。但是你的空载体是什么呢？如果也是pmd18-T那么，我认为你的酶切是完全失败的。T载体是不会切出三条带的。一般做双酶切，就是两条带。
赞一下 回复此楼
7楼2011-11-03 13:06:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by dream-fish at 2011-11-03 13:06:55:
你做的是双酶切，那么我就理解为你是打算做了酶切之后连接到其他载体上面去。但是你的空载体是什么呢？如果也是pmd18-T那么，我认为你的酶切是完全失败的。T载体是不会切出三条带的。一般做双酶切，就是两条带。

好受打击啊，做这个是想做个验证~~我现在刚开始接触，还是不太明白~~
赞一下 回复此楼
8楼2011-11-06 15:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dream-fish

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 静海 at 2011-11-06 15:29:22:
好受打击啊，做这个是想做个验证~~我现在刚开始接触，还是不太明白~~

这个可能是因为你基因内部有你用的酶的位点。用软件先认真分析下，或者把T载体送测序。
赞一下 回复此楼
9楼2011-11-16 14:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blastfeng

金虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-17 00:09:38
既然是公共实验，要求不是很严格，不到你的酶切条件是什么，16摄氏度四小时还是过夜，主要在操作上，有时候很小的细节操作造成实验结果不同是很正常的，比如吹打次数上的不同
赞一下(1人) 回复此楼
生活就像PCR
10楼2011-11-16 17:37:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 静海 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +12 刘墨墨 2026-04-13 12/600 2026-04-18 23:31 by 路病情
[考研] 生物学调剂 +10 纸扇zhishan 2026-04-13 10/500 2026-04-18 21:19 by zqndavala
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 化学070300 求调剂 +29 哈哈哈^_^ 2026-04-12 29/1450 2026-04-18 15:56 by Equinoxhua
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[考研] 304求调剂 +7 castLight 2026-04-16 7/350 2026-04-17 20:05 by 关一盏灯cd
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-16 15:18 by jiahl2024
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 297工科，求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭