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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做限制性酶切，请帮忙分析下
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静海

新虫 (小有名气)

[求助] 做限制性酶切，请帮忙分析下

第一次做限制性酶切，请大家帮忙分析下(*^__^*) 嘻嘻……
marker是5000。载体是3号是我的条带。我想教一下，
1.我的有4条带，从离加样孔最近的是不是依次为：载体、空载体、目的基因、杂质？
2.理想的情况是3条带么？跑的最慢的那条是未切的载体，亮度较小。其次是空载体和目的基因条带，亮度较大且二者相近。
3.从亮度来看，1、3条带和2、4、5有较大区别，是因为？
4.怎么改进呢？最大的问题是？
O(∩_∩)O谢谢~~~

限制酶切电泳图

[ Last edited by 1949stone on 2011-10-31 at 21:51 ]
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1楼 2011-10-31 18:46:13
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分子生物化学

金虫 (小有名气)

实验菜鸟

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-11-01 17:56:40
限制性内切酶在最佳环境在可以只切单一酶切位点，但是如果环境不适宜，它也有可能去切其他限制性内切酶的酶切位点，我估计你酶切条件不对，请参照酶的说明书改一下酶切条件。
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做实验有失败才能学到东西
3楼2011-11-01 15:58:05
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
我觉得你应该把每个泳道对应点的样品是什么，要说清楚。
不然不好分析。
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2楼2011-11-01 12:59:08
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静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jingdejun at 2011-11-01 12:59:08:
我觉得你应该把每个泳道对应点的样品是什么，要说清楚。
不然不好分析。

做的是公共实验，只有3号的加样孔是我的样。质粒是pMD19-T。用的两种限制性酶：HindIII、EcoRI.
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4楼2011-11-02 19:55:58
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静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 分子生物化学 at 2011-11-01 15:58:05:
限制性内切酶在最佳环境在可以只切单一酶切位点，但是如果环境不适宜，它也有可能去切其他限制性内切酶的酶切位点，我估计你酶切条件不对，请参照酶的说明书改一下酶切条件。

你指的是酶的星活性是么？如果出去这个原因，还有可能是别的不？
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5楼2011-11-02 21:12:41
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