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如来的观音

金虫 (小有名气)

[交流] 不解的问题，q-PCR结果分析。

RT-pcr的数据分析（2-deltadeltaCT法）是建立在假设目的基因和内参基因的扩增效率大概一致的前提下，并且在95-110%之间合适，那怎样才能确保扩增效率呢？难道每次上机前都要做标准曲线计算扩增效率吗，或者所有试验只做一次标准曲线计算扩增效率用在所有的后续试验中？
谢谢
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1楼 2011-10-28 11:05:38
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如来的观音

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-10-28 11:20:56:
楼主可以看一下相对定量的介绍，德尔塔法确定引物的扩增效率相近，双标准曲线每次得带标准曲线

那你怎么就确定不同基因的或者同基因不同样本的扩增效率呢？难道会是系统默认效率相近？
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5楼2011-10-29 00:08:27
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-28 18:06:39
如来的观音(金币+1): 2011-10-29 12:31:28
楼主可以看一下相对定量的介绍，德尔塔法确定引物的扩增效率相近，双标准曲线每次得带标准曲线
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-10-28 11:20:56
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529651676

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
个人觉得是每次上机前都要做标准曲线计算扩增效率
但是好像很多人都没这样做
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-10-28 19:51:21
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
如来的观音(金币+1): 2011-10-29 12:32:26
delta Ct值法相对定量的话，一般一对引物做一次标准曲线确定扩增效率就可以了，不过我看有不少人根本就不管扩增效率直接做的……
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4楼2011-10-28 22:30:14
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