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如来的观音

金虫 (小有名气)

[交流] 不解的问题，q-PCR结果分析。

RT-pcr的数据分析（2-deltadeltaCT法）是建立在假设目的基因和内参基因的扩增效率大概一致的前提下，并且在95-110%之间合适，那怎样才能确保扩增效率呢？难道每次上机前都要做标准曲线计算扩增效率吗，或者所有试验只做一次标准曲线计算扩增效率用在所有的后续试验中？
谢谢
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1楼 2011-10-28 11:05:38
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
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wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-28 18:06:39
如来的观音(金币+1): 2011-10-29 12:31:28
楼主可以看一下相对定量的介绍，德尔塔法确定引物的扩增效率相近，双标准曲线每次得带标准曲线
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2楼2011-10-28 11:20:56
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529651676

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
个人觉得是每次上机前都要做标准曲线计算扩增效率
但是好像很多人都没这样做
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3楼2011-10-28 19:51:21
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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如来的观音(金币+1): 2011-10-29 12:32:26
delta Ct值法相对定量的话，一般一对引物做一次标准曲线确定扩增效率就可以了，不过我看有不少人根本就不管扩增效率直接做的……
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4楼2011-10-28 22:30:14
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如来的观音

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-10-28 11:20:56:
楼主可以看一下相对定量的介绍，德尔塔法确定引物的扩增效率相近，双标准曲线每次得带标准曲线

那你怎么就确定不同基因的或者同基因不同样本的扩增效率呢？难道会是系统默认效率相近？
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5楼2011-10-29 00:08:27
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如来的观音

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-10-28 22:30:14:
delta Ct值法相对定量的话，一般一对引物做一次标准曲线确定扩增效率就可以了，不过我看有不少人根本就不管扩增效率直接做的……

好像我们实验室这边从来不做标准曲线确定扩增效率，但我总觉得不妥，发好点的文章需要说明扩效率吗，或者说你们实验室都是一般一对引物做一次标准曲线确定扩增效率吗，这对发文章有影响吗？谢谢
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6楼2011-10-29 00:13:47
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 如来的观音 at 2011-10-29 00:13:47:
好像我们实验室这边从来不做标准曲线确定扩增效率，但我总觉得不妥，发好点的文章需要说明扩效率吗，或者说你们实验室都是一般一对引物做一次标准曲线确定扩增效率吗，这对发文章有影响吗？谢谢

发文章一般不需要扩增效率的数据，直接上最后定量的结果就可以了。不过建议你至少测一次扩增效率，毕竟，扩增效率差太多，定量结果就不可靠啦。
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7楼2011-10-29 13:00:25
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