应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于PCR退火温度
181/1返回列表
查看: 3218  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

hgq115

金虫 (小有名气)

[交流] 关于PCR退火温度

PCR引物设计的时候，用不同的软件设计会发现同一个引物的Tm值相差比较大，与用4（G+C）*2(A+T)获得的结果也不同。请问各位虫友在设计的时候是如何确定引物的Tm值的？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-10-20 09:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
hgq115(金币+1):谢谢参与
adslye(金币+2): 鼓励交流！55王道~ 2011-10-21 08:55:03
跑PCR的时候一律55度的飘过....
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2011-10-20 11:30:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuhedong1817

木虫 (正式写手)
★
hgq115(金币+1):谢谢参与
hgq115(金币+4): 2011-10-20 14:15:53
adslye(BioEPI+1): 对的，就是这个道理。只是公式不同，无对错之分。 2011-10-21 08:55:44
根据查找的文献发现，计算Tm值的至少有20几个公式，而且也没有通用的公式，但是大多数相差都在10℃范围内。所以，只要你根据引物合成公司提供的Tm值，然后根据Tm+5，Tm-5这个数值范围，做一个退火温度梯度，然后根据PCR的条带浓度大小，就可以得到较准确的退火温度了。
赞一下(3人) 回复此楼
6楼2011-10-20 12:33:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
hgq115(金币+1):谢谢参与
adslye(金币+2): 鼓励交流，TM计算公式不同而已，没有对错。 2011-10-21 08:54:35
利用软件引物，实际Tm值以公司的报告为准。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-10-20 09:50:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunqinyan

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
hgq115(金币+1):谢谢参与
adslye(金币+2): 鼓励交流！ 2011-10-21 08:54:45
primer 5.0设计的时候就会给
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-10-20 10:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuushu

金虫 (正式写手)
★
hgq115(金币+1):谢谢参与
引物合成回来，单子上有写Tm值
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-10-20 15:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fisheart

金虫 (小有名气)
★
hgq115(金币+1):谢谢参与
设计时正反引物TM值范围尽量一致就可以了，公司返回的测序单会提供准确的
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-10-20 15:40:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sptm1019

银虫 (小有名气)
★
hgq115(金币+1):谢谢参与
都是55做的
回复此楼
10楼2011-10-20 16:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cloverplm

金虫 (小有名气)
★
hgq115(金币+1):谢谢参与
hgq115(金币+4): 2011-10-20 18:06:26
设计引物时Tm 值以软件计算值为参考，不要太高或太低就行，实际合成引物后，由于离子浓度的不同，导致退火温度有所改变，以公司引物合成报告单为参考，上下浮动5℃的值都可以P。可以通过梯度PCR决定最合适的退火温度。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-10-20 16:52:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

第五平原

木虫 (正式写手)
★
hgq115(金币+1):谢谢参与
顶4楼，我也是55度，哈哈。
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-10-20 22:53:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoelxx

铁杆木虫 (正式写手)
★
hgq115(金币+1):谢谢参与
只要同一软件算出来的上下游引物Tm值差距不太大，然后引物来了可以适当的在Tm值上下5度范围内pcr试一下，就行了
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2011-10-21 10:00:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hgq115

金虫 (小有名气)
谁知道引物3'端包含几个碱基吗？
赞一下 回复此楼
14楼2011-10-21 12:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngker918

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
不管是软件还是引物公司都是根据一定的算法算出来的，没有严格的对错之分。建议楼主在新引物来的时候做一锅梯度退火温度试一下
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2011-10-21 14:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suzy150

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
先通过软件设计引物 实验中的退火温度用软件中显示的Tm值-5度 若P不出来 就做温度梯度 一般50-70度就可以了
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2011-10-21 17:33:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhen_fang

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
公司会给你具体的单子，上面一般有温度吧，正负5上下，一切OK
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2011-10-21 17:45:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
clarktao5楼
2011-10-20 12:08   回复  
hgq115(金币+1):谢谢参与
haoqi0077楼
2011-10-20 12:48   回复  
hgq115(金币+1):谢谢参与
liuxiuaza16楼
2011-10-21 15:56   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 hgq115 的主题更新
181/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭