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doudouxiong

铜虫 (小有名气)

[求助] 真菌基因组DAN提取图片,求高人指点

这是我提取的真菌基因组的DNA,因为材料量比较少的问题,因此采用液氮研磨,然后再用CTAB研磨,后用氯仿异戊醇抽提两次,然后用酒精洗,结果每次检测的图片都是这样,请问这是DNA降解还是蛋白质污染,如果是DNA降解,那么是我研磨的时候降解的吗?可能有那种情况就是研磨的时候把DNA研磨断了或者是破了导致的降解这一说法吗?
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by 怎么都行 at 2011-10-17 02:11:30:
遇上这种情况还不如多花点钱用试剂盒呢

老师不给买
5楼2011-10-17 08:28:09
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
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6楼: Originally posted by honjie at 2011-10-17 10:12:50:
加蛋白酶K60度处理1小时看看,看你的图片有两个泳道有堵孔现象,可能是蛋白,另外,DNA有讲解的现象,建议用SDS破膜剂试试看,减少研磨次数和时间,量若不多,加SDS破膜后反复吹打即可,未必要研磨。

不好意思,本来想给你金币的,结果计算错了,送一段花给你吧
9楼2011-10-18 23:56:39
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 另一个天堂 at 2011-10-17 11:56:53:
2个原因:蛋白质污染或者DNA降解
抽提时可以用酚:氯仿:异戊醇抽屉一下,防止蛋白质污染。最后再用RNase处理。如果还是这样的结果,那就是DNA降解了

没有金币了,送朵鲜花给你吧
10楼2011-10-18 23:57:32
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
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8楼: Originally posted by ybs007 at 2011-10-17 18:25:23:
我以前提过酵母基因组 用氯化苄法   你可以参考参考

谢谢关注
11楼2011-10-18 23:57:57
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 蓝月望宁 at 2011-10-19 09:54:07:
我也来说说。
1.你的电泳图,MARker条带跑的很漂亮,可以排除电泳条件方面的原因。
2.点样孔发亮的原因是有机物和蛋白质等杂质,这个不是关键问题。
3.样品DNA条带弥散,几乎布满整个泳道,说明DNA严重降解,这 ...

您说的挺对的,因为我的材料量比较少,所以我认为要保证充分的破壁,可是用液氮法研磨时孢子量本来很少,造成显微镜下观察被磨破的孢子量很少,加上倒液氮的时候还有一些孢子飞出去,因此我放弃这种方法。上图提取的DNA是我先用液氮研磨后又加入CTAB研磨,主要是保证少量材料全部破壁,可是由于加入CTAB研磨时间过长,造DNA的降解和蛋白质的污染,可是时间短了又不能破壁,有没有什么既能够破壁充分,有不引入杂质或者造成DNA降解的方法呢?请您帮忙,另外由于老师不建议用试剂盒和较贵的试剂,所以目前只能突破这个破壁又有纯化的DNA的方法了,请问您有没有什么好的建议,话说我的材料量真的少的可怜啊
13楼2011-10-19 18:12:14
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