[求助] 双酶切后片段偏大

选用EcoRI和HindIII双酶切位点，质粒为pET28a，可是每次挑的转化子在双酶切后片段都会偏大，是什么原因？我的片段是以连在T载上为模板PCR的（因为是反转录的片段），P完后跑电泳发现没有变化，但是每次都是连接完后再双酶切就偏大了，是怎么回事啊？求助啊，绝望了都……

1楼 2011-10-12 19:10:34

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铜虫 (小有名气)

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wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-13 12:33:15

这个问题，曾经纠结过我很长时间，包括连接后的片段，双酶切后变小或者变大，也查过一些文献，据说在转导的时候，有时候片段会串联，或者断裂~~BLABLA，重新做吧

3楼2011-10-12 23:17:25

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专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-10-12 21:00:12

是不是配胶的问题。。。你看看胶孔是不是有些偏高呢？
实在不行测序吧。。。

Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

2楼2011-10-12 20:20:47

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