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houhoujiayou

银虫 (小有名气)

[求助] 双酶切后片段偏大

选用EcoRI和HindIII双酶切位点,质粒为pET28a,可是每次挑的转化子在双酶切后片段都会偏大,是什么原因?我的片段是以连在T载上为模板PCR的(因为是反转录的片段),P完后跑电泳发现没有变化,但是每次都是连接完后再双酶切就偏大了,是怎么回事啊?求助啊,绝望了都……
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖


amisking(金币+1): 鼓励发帖交流! 2011-10-12 21:00:12
是不是配胶的问题。。。你看看胶孔是不是有些偏高呢?
实在不行测序吧。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-10-12 20:20:47
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啮风

铜虫 (小有名气)


wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-13 12:33:15
这个问题,曾经纠结过我很长时间,包括连接后的片段,双酶切后变小或者变大,也查过一些文献,据说在转导的时候,有时候片段会串联,或者断裂~~BLABLA,重新做吧
3楼2011-10-12 23:17:25
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